에스디 뎅기 엔에스원 항원 엘리자(SD Dengue NS1 Ag ELISA) (수출용) - 의약품 상세정보

1) 검체의 채취 및 보관

(1) 적당한 항응고제를 이용하여 전혈 검체를 채취한다.

(2) 혈청 검체를 얻기 위해 채혈한 혈액을 원심분리 한다.

(3) 검체 채취 후 즉시 검사하지 않는 경우 2∼8℃에서 보관하고, 3일 이상 보관이 필요한 경우 냉동 보관한다. 단, 냉장 또는 냉동 보관한 검체는 사용 전, 반드시 실온에 옮겨야 한다.

2) 시액의 조제

(1) 농축 효소표지항체액(101배 농축액) 준비

농축 효소표지항체액(101배 농축액)과 효소표지항체 희석액을 1 : 100의 비율로 튜브에 넣고, 잘 혼합한다. (예 : 농축 효소표지항체액 0.1 ml + 효소표지항체 희석액 10 ml) 매 시험 시마다, 필요한 양만큼 조제한다.

(2) 세척액의 준비(20배 농축액)

농축 세척액(20배 농축액)과 증류수를 1 : 19의 비율로 튜브에 넣고 잘 혼합한다. (예 : 농축세척액 50ml에 증류수 950ml을 첨가하여 세척액을 조제한다.) 세척액 내에 완전히 용해되지 않은 결정이 남아있는 경우, 37℃에 몇 분간 정치시킨다.

1) 키트는 2 ~ 8℃에서 냉장 보관한다. 키트는 밀봉된 상태에서 패키지 또는 각 시약의 라벨에 인쇄된 사용기간까지 안정하다.

2) 시약의 개봉 후 안정성

* 희석액 조제 후 30분 이내에 50㎕ 씩 플레이트 well 에 주입해야한다.

(주의: 희석된 효소표지 항체액을 바로 사용하지 않는 경우, 2~8℃에서 냉장 보관하면 1일간 보관 가능하다.)

1) 음성 대조액 3 wells, 양성 대조액 2 wells 및 검사하고자 하는 시료의 wells 만큼 플레이트를 준비한다.

2) 준비된 플레이트 각 well에 검체 희석액을 50㎕씩 분주한다.

3) 음성 대조액 3 wells, 양성 대조액 2 wells 및 검사하고자 하는 시료를 검체 희석액이 분주된 플레이트 각 well에 50㎕씩 분주하고 잘 혼합한다.

4) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하여 잘 혼합한 후, 37±1℃ 항온기에서 60분 반응시킨다.

5) 희석된 세척액 350 ㎕ 를 각 well 에 넣고, 5회 세척한다. 이때, 매 회 세척액을 well에 완전히 채우고 약 10초 정도 둔 후, well 내의 잔여 용액을 제거한다. (세척 전, 세척액 한 병(50 ml)을 950 ml의 증류수에 혼합한다.)

또는, 희석된 세척액을 각 well 에 넣고, 자동 세척기를 이용하여 5회 세척한다.

5-1) 세척 과정

가. 자동 세척

(1) 각 well 의 잔여물을 완전히 제거한다

(2) 희석된 세척액을 각 well에 채운다.(well 당 350 ㎕)

(3) 5회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다.

나. 수동 세척

(1) 각 well 의 잔여물을 완전히 제거한다.

(2) 희석된 세척액을 각 well에 채운다. 이 때, 세척액에 거품이 생기면 세척이 제대로 되지 않을 수 있으므로 주의한다. 세척 후 즉시 세척액을 제거한다.

(3) 위 (2)번 과정을 4번 더 반복하여, 총 5회 세척한다.

(4) 마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 세척액 이 완전히 제거될 수 있도록 한다.

6) 희석된 효소표지항체액을 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주한다.

7) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한 후, 37±1℃ 항온기에서 60분 간 반응시킨다.

8) 희석된 세척액 350 ㎕ 를 각 well 에 넣고, 5회 세척한다. 이때, 매 회 세척액을 well에 완전히 채우고 약 10초 정도 둔 후, well 내의 잔여 용액을 제거한다. (세척 전, 세척액 한 병(50 ml)을 950 ml의 증류수에 혼합한다.)

또는, 희석된 세척액을 각 well 에 넣고, 자동 세척기를 이용하여 5회 세척한다. (5-1) 세척 과정 참조)

9) 기질액(TMB)을 각 well에 100㎕씩 분주한다.

10) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 실온(15~30℃)에서 10분 간 반응시키면, 파란색으로 발색된다.

11) 반응 정지액을 각 well 당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하면, 파란색이 노란색으로 변한다.

12) 30분 이내에, 측정파장 450 nm, 참조파장은 620 nm로 하여 각 well의 흡광도를 측정한다.

1) 결과 판정

가. 양성 : 검체가 판정 기준값 이상의 흡광도 값을 나타내는 경우

나. 음성 : 검체가 판정 기준값 미만의 흡광도 값을 나타내는 경우

2) 판정 기준값 (Cut-off) 계산

음성 대조액의 평균값을 계산한 후, 0.300을 더한다.

: 음성 대조액의 평균 흡광도 + 0.300 = 판정 기준값 (Cut-off)

3)재시험 기준

음,양성 대조액 및 검체의 흡광도 값은 다음 범위에 포함되어야 한다.

(1) 0.000 ≤ 흡광도(음성) ≤ 0.200

(2) 흡광도(양성) ≥ 1.000

- 만약 음성 대조액 중 1개 값이 (1)번 범위를 벗어났을 경우, 해당 흡광도 값은 무시하고 나머지 두 개 값의 평균값으로 산출한다. 만일 2개 이상의 값이 (1)번의 범위를 벗어났을 경우 재시험 해야 한다.

- 양성 대조액의 흡광도 값은 2개 모두 (2)번의 조건에 부합해야한다. (2)의 범위를 벗어났을 경우, 재시험 해야한다.

4)결과 해석

(1) 음성 결과

:검체 내에 존재하는 뎅기바이러스 NS1 항원의 역가가 검출 한계보다 낮거나, 검체가 채취된 기간 중에 존재하지 않는 경우, 음성 결과를 나타낼 수 있다.

(2) 양성 결과

: 최초 감염 또는 재감염 시, 뎅기 NS1 항원은 증상 발현 후 1일 ~ 9일 사이에 가능하다. 뎅기 감염을 확진하기 위해서는 추가적인 검사를 실시해야 한다.