에스디 뎅기 아이지엠 캡쳐 엘리자 테스트 키트 (SD Dengue IgM Capture ELISA test kit) (수출용) - 의약품 상세정보

1) 검체의 채취 및 보관

(1) 적당한 항응고제를 이용하여 전혈 검체를 채취한다.

(2) 혈청 검체를 얻기 위해 채혈한 혈액을 원심분리 한다.

(3) 검체 채취 후 즉시 검사하지 않는 경우 2∼8℃에서 보관하고, 3일 이상 보관이 필요한 경우 냉동 보관한다. 단, 냉장 또는 냉동 보관한 검체는 사용 전, 반드시 실온에 옮겨야 한다.

2) 검체의 준비

(1) 키트 내의 플레이트 및 시약을 꺼내어 실온(15~30℃)에 둔다.

(2) 적당한 테스트 튜브 또는 마이크로 튜브를 준비하고, 음성대조액(3 well), 양성대조액(2 well) 및 검사하고자 하는 시료를 검체 희석액으로 100배 희석한다. ; (예) 음성대조액/양성대조액/혈청 검체 10㎕ + 검체 희석액 990㎕

(3) 잘 섞어준다.

1) 키트는 2 ~ 8℃에서 냉장 보관한다. 키트는 밀봉된 상태에서 패키지 또는 각 시약의 라벨에 인쇄된 사용기간까지 안정하다.

2) 시약의 개봉 후 안정성

* 희석액 조제 후 30분 이내에 100㎕씩 플레이트 well 에 주입해야한다.

(주의: 희석된 효소표지 항체액을 바로 사용하지 않는 경우, 2~8℃에서 냉장 보관하면 1일간 보관 가능하다.)

[뎅기바이러스 항원 분말 준비 과정]

1) 뎅기바이러스 항원 분말 1병 (60 ug)을 1.5 ml의 효소표지 항체희석액에 희석한다.

2) 위 1)의 희석된 뎅기바이러스 항원 분말을 농축효소표지 항체액에 1:1 비율로 혼합한다.

; (예) 농축효소표지 항체액 1.5 ml + 희석된 뎅기바이러스 항원 분말 1.5 ml

→ 24 well 에 사용 가능한 분량이다.

3) 잘 혼합한 후, 실온(15~30℃)에 60분간 둔다. 남은 혼합 용액은 폐기한다.

[검사 과정]

1) 희석된 음성 대조액, 양성 대조액 및 검사하고자 하는 시료를 플레이트 각 well에 100㎕ 씩 분주한다.

2) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한 후, 믹서를 이용하여 잘 혼합한 후, 37±1 ℃ 항온기에서 60분 간 반응시킨다.

3) 희석된 세척액 350 ㎕ 를 각 well 에 넣고, 5회 세척한다. 이때, 매 회 세척액을 well에 완전히 채우고 약 10초 정도 둔 후, well 내의 잔여 용액을 제거한다. (세척 전, 세척액 한 병(50 ml)을 950 ml의 증류수에 혼합한다.)

또는, 희석된 세척액을 각 well 에 넣고, 자동 세척기를 이용하여 5회 세척한다.

3-1) 세척 과정

가. 자동 세척

(1) 각 well 의 잔여물을 완전히 제거한다.

(2) 희석된 세척액을 각 well에 채운다.(well 당 350 ㎕)

(3) 5회의 세척 과정이 끝나면, 플레이트를 뒤집어 흡습타월에 대고 털어서, 완전히 세척액이 제거될 수 있도록 한다.

나. 수동 세척

(1) 각 well 의 잔여물을 완전히 제거한다.

(2) 희석된 세척액을 각 well에 채운다. 이 때, 세척액에 거품이 생기면 세척이 제대로 되지 않을 수 있으므로 주의한다. 세척 후 즉시 세척액을 제거한다.

(3) 위 (2)번 과정을 4번 더 반복하여, 총 5회 세척한다.

(4) 마지막 세척 과정이 끝난 후, 플레이트를 뒤집어 흡습 타월에 대고 털어서, 세척액 이 완전히 제거될 수 있도록 한다.

4) 희석된 효소표지항체액을 잘 섞은 후, 플레이트 각 well에 100㎕씩 분주한다.

5) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한 후, 37±1℃ 항온기에서 60분 간 반응시킨다.

6) 희석된 세척액 350 ㎕ 를 각 well 에 넣고, 5회 세척한다. 이때, 매 회 세척액을 well에 완전히 채우고 약 10초 정도 둔 후, well 내의 잔여 용액을 제거한다. (세척 전, 세척액 한 병(50 ml)을 950 ml의 증류수에 혼합한다.)

또는, 희석된 세척액을 각 well 에 넣고, 자동 세척기를 이용하여 5회 세척한다. (3-1) 세척 과정 참조)

7) 기질액(TMB)을 각 well에 100㎕씩 분주한다.

8) 첨부된 밀봉테이프로 밀봉하고, 실온(15~30℃)에서 10분 간 반응시키면, 파란색으로 발색된다.

9) 기질액(TMB) 분주 과정과 동일하게, 반응 정지액을 각 well 당 100㎕씩 넣고 잘 혼합하면, 파란색이 노란색으로 변한다.

10) 30분 이내에, 측정파장 450 nm, 참조파장은 620 nm로 하여 각 well의 흡광도를 측정한다.

1) 정도 관리

음,양성 대조액 및 검체의 흡광도 값은 다음 범위에 포함되어야 한다.

(1) 0.000 ≤ 흡광도(음성) ≤ 0.300

(2) 흡광도(양성) ≥ 1.000

만약 음성 대조액 중 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우, 해당 흡광도 값은 무시한다. 양성 대조액의 흡광도 값은 2개 모두 1.000 이상이어야 한다. 위의 범위를 벗어났을 경우, 재시험 하여야한다.

2) 판정 기준값 (Cut-off) 계산

음성 대조액의 평균값을 계산한 후, 0.300을 더한다.

: 음성 대조액의 평균 흡광도 + 0.300 = 판정 기준값 (Cut-off)

3)결과의 판정

검체는 아래의 기준에 따라 결과를 판정한다.

(1) 음성 결과

판정 기준값 미만의 흡광도 값을 나타내는 검체 : 항 뎅기 IgM 항체 음성

: 항 뎅기 IgM 항체가 측정되지 않음을 의미한다. 만약 초기 뎅기 감염이 의심된다면, 14~17일 후 재검사를 수행해야 한다.

(2) 양성 결과

판정 기준값 이상의 흡광도 값을 나타내는 검체 : 항 뎅기 IgM 항체 양성

: 검출 가능한 항 뎅기 IgM 항체가 존재한다는 것은 초기 뎅기 바이러스 감염을 나타낸다. 검사 결과가 판정 기준값과 같거나 그 이상인 경우, 반드시 재검사하고, 재검사의 결과도 동일하다면, 추가적인 검사를 통한 확진이 필요하다.