디아키 에취에이브이 아이지지 엘라이자 - 의약품 상세정보

1) 혈청(Serum)을 검체로 사용한다.

2) 정맥천자로 채취한 혈액을 항응고제가 들어있지 않은 튜브에 수집한다.

3) 실온에 30분간 방치하여 응고가 일어나도록 한 후 원심분리에 의해 상청의 혈청을 분리시킨다.

4) 분리된 혈청은 2~8℃에서 보관 시 2주간, -20℃이하에서 보관 시 최대 6개월까지 사용가능하다.

※ 용혈된 검체는 위양성을 보일 수 있으므로 사용하지 않는다.

1) 냉장보관 또는 동결되었던 검체와 시약은 실험 시작 30분전에 상온(15~25℃)에 두고 완전히 균질화 시킨 후 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.

2) 검사시 흡광도 측정은 SEAC사의 SIRIO S 분광광도계로 측정한다.

3) 세척액의 조제

농축 세척액을 증류수 또는 이온 정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

예) 필요량이 1000ml일 경우 농축 세척액 50ml에 증류수나 이온 정제수 950ml를 넣어 총 부피가 1000ml가 되도록 한 다음 잘 섞는다.

※ 농축 세척액은 냉장 보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우 37℃ ± 1℃ 항온 수조에서 녹인 다음 사용한다.

1) 각 검사시, 1개의 기질 Blank, 3개의 음성대조액, 2개의 양성대조액과 검사하고자 하는 검체수를 결정한 후 원하는 웰 만큼 스트립 홀더에 고정시킨다. 스트립의 웰 밑바닥은 손으로 만지지 않도록 주의한다.

2) 음성대조액, 양성대조액과 검체들을 웰에 가할 위치를 정하여 기록을 한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰에 50ul씩 차례로 분주한다.

3) 기질 Blank를 제외한 모든 웰에 접합체액을 50ul 차례로 분주한다. 단, 이 과정에서 웰 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

4) 스트립 홀더를 가볍게 쳐서 잘 혼합 후 밀봉 테이프로 밀봉하고 실온(18℃~25℃) 에서 30분(±5분)동안 300rpm으로 혼합반응 시킨다.

5) 반응 후 밀봉 테이프를 제거하고 각 웰의 내용물을 흡입해내고 미리 제조된 세척액으로 5회 세척한다.(각 웰당 300ul 이상)

6) 세척이 완료되면 플레이트를 흡습지에 뒤집어 적당히 쳐서 제거되지 않은 세척액을 완전히 제거한 다음, 기질액을 Blank를 포함한 모든 웰에 100ul씩 넣고 스트립홀더를 가볍게 쳐서 잘 혼합한 후 실온(18℃~25℃) 암소에서 20분(±1분)동안 반응시킨다.

7) 반응이 완료되면 반응 정지액을 모든 웰에 100ul씩 분주하여, 흔들어 주어 반응이 잘 일어나게 한다.

8) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습지로 잘 닦아 습기를 제거하고 측정파장 450nm, 참조 파장(reference) 620nm, 405nm에서 흡광도를 측정한다.

* 흡광도 측정은 반응 정지액을 분주한 후 30분 이내에 측정하여야 한다.

< 검사과정 요약 >

< 결과 판정 >

1) 음성대조액의 평균값 : 3개의 음성대조액 흡광도의 평균값을 구한다. 이때, 평균값의 0.5~1.5 배의 범위를 벗어나는 값은 제외 시키고 다시 평균값을 구한다.

- 만약 3개의 음성대조액 흡광도 값 중 2개 이상의 값이 평균값의 0.5~1.5배 범위를 벗어났을 경우 재시험을 하여야 한다.

2) 양성대조액의 평균값 : 2개의 양성대조액 흡광도의 평균값을 구한다.

3) 판정 기준값(Cut-off value) 계산 = 음성대조액 평균값 X 0.5

< 결과 해석 >

1) 음성 : 검체의 흡광도가 판정 기준 값보다 크면 반응성이 없는 것으로 간주하고 음성으로 판정한다.

① 음성대조액의 평균 흡광도 값은 1.5 이상 이어야 한다.

② 음성대조액의 평균 흡광도 값이 위 범위(1)의 ①)를 벗어난 경우 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재시험을 하여야한다.

2) 양성 : 검체의 흡광도가 판정 기준 값보다 보다 작거나 같으면 반응성이 있는 것으로 간주하고 양성으로 판정한다.

① 양성대조액의 평균 흡광도 값은 0.04 이하 이어야 한다.

② 양성대조액의 평균 흡광도 값이 위 범위(2)의 ①)를 벗어난 경우 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이므로 그 원인을 확인한 후 재시험을 하여야 한다.

3) 재시험

① 재시험이 필요한 경우, 각각 두 개 웰을 사용하여 재시험을 하여야 한다. 재시험 결과 중 하나 이상의 웰에서 반응성이 있으면 양성으로 판정하고 두 개 웰 모두 반응성이 없으면 음성으로 판정한다.

② Cut-off 값에서 ± 10% 이내(gray zone)의 구간에 해당하는 흡광도를 나타내는 검체는 재시험을 실시하여 최종결과를 판정한다. 이때 동일한 결과를 보일 경우 전문의와 상의하여 최종 판정한다.

※ 결과 판정 주의사항

본 제품은 HAV IgM 등에 의한 위양성 또는 위음성 결과의 가능성을 완전히 배제할 수 없으므로 본 제품의 결과만을 기초로 최종 진단을 해서는 안 되며 다른 검사방법(A형간염바이러스의 면역글로블린 M)과 임상소견에 근거한 전문의의 판단에 의하여 최종 진단을 내려야 한다.

※ 검사시 흡광도 측정은 SEAC사의 SIRIO S 분광광도계로 측정한다.