마이코패스트에볼루션2 - 의약품 상세정보

배지내 특정한 기질(요소 및 아르기닌)이 포함되어 있어 그 기질을 사용하는 마이코플라즈마(Ureaplasma urealyticum-요소, Mycoplasma hominis-아르기닌)의 증식여부에 따라 pH가 변화하고, 그에 따른 지시약(페놀레드)색깔의 변화로 마이코플라즈마의 동정 및 계수를 한다. 또한, 여러 항생제가 포함된 웰(well)에서의 마이코플라즈마 성장여부에 따라 각 항생제 내성여부를 판별할 수 있다.

가. 검체 채집

1) 자궁경부 및 질

Dacron 또는 레이온스왑 또는 사이토블러쉬로 검체를 얻는다.

자궁경부의 경우 마이코플라즈마가 점막세포에 강하게 붙어 있으므로, 검체 채집전에 분비물을 제거하기 위하여 다른 스왑으로 주의하여 닦아낸 후 새 스왑으로 검체를 채취한다. 채취시 좋은 검체를 얻기 위하여 점액층을 잘 긁어내야 한다.

2) 요도

요도 부위를 깨끗이 한 후 스왑이나 스크레이프로 세포를 얻는다.

3) 정액, 뇨

멸균 튜브나 병에 정액이나 최초 배뇨물을 얻는다.

4) 위분비물

신생아로부터 카테타를 통해 위분비물을 흡인하여 멸균병에 옮긴다.

나. 시약조제

1) 모든 시약은 바로 사용할 수 있도록 준비한다. 각 바이알은 키트의 사용기간까지 원포장 안에 2~8℃에서 보관한다.

2) UMMt는 일시적으로 실온에 보관할 수는 있으나, 2~8℃에서 보다 안정하다.

3) 트레이의 절반만 사용했다면, 나머지 절반은 원포장 안에 넣어 2~8℃에서 3주까지 보관할 수 있다.

4) S.M.h.는 개봉 후 3개월간 안정하다.

5) 키트 안에 들어있는 시약을 얼게해서는 안된다.

6) 시험에 필요하나 제공되지 않는 것 :

검체 채집 기구(스왑, 사이토블러쉬, 액체검체를 위한 멸균용기 등)

피펫 및 팁

감염 폐기물을 위한 휴지통

파라핀 오일

37±1℃ 배양기

다. 검사방법

1) 수송배지(UMMt)로 이동

스왑 검체 : UMMt 바이알에 스왑을 넣는다.

액체 검체 : UMMt 바이알에 검액 200㎕를 접종한다.

접종된 UMMt를 실온(18~25℃)에서 8시간 또는 2~8℃에서 16시간 동안 놓아둔다.

2) 검사과정

모든 시약은 실온이 되게 한다.(20~30분)

(1) 배양배지(UMMlyo)의 regeneration

각각의 접종된 UMMt를 UMMlyo 바이알에 넣고 잘 섞는다. Regeneration된 UMMlyo는 오렌지색을 나타내야 한다.

(2) 트레이 접종

각 웰 시리즈를 확인한다.

필름을 제거하고 각 열에 아래와 같이 각각 넣는다.

웰 1~10 : 접종된 UMMlyo 100㎕

웰 9~10 : S.Mh supplement 50㎕

웰 1~10 : 파라핀오일 2방울

필름으로 웰을 다시 덮는다.

검증이 필요한 경우에 대비하여 바이알에 남은 UMMlyo는 2~8℃에서 최소 48시간 보관한다.

(3) 트레이 배양

37±1℃에서 24시간 동안 배양한다.

U.u. 및 M.h.의 정량을 위해 24시간에 결과를 읽는다. 48시간 까지 배양시간을 연장하면 약한 효소활성을 갖는 균주까지 식별할 수 있다.

라. 판독

1) 밸리데이션

각 열의 모든 웰이 투명한지 검사한다. 웰에 혼탁이 있다면 세균감염이 있음을 나타낸다. 이 경우 시험을 반복한다.

2) 판독 및 해석

서로 다른 웰의 색깔로 결과를 판독한다.

웰의 색깔이 붉게 변한 경우(알칼리성)는 비뇨생식계의 마이코플라스마 증식을 나타낸다.

노란색인 경우는 비뇨생식계의 마이코플라스마 증식이 없음을 나타낸다.

주의 : 오렌지색인 경우 양성으로 판정해야 한다.(한계)

(1) 동정(Identification) (7,8,9웰)

7,8,9웰의 변색 양상으로 동정할 수 있다.

(2) 정량(Enumeration) (1,2,3 및 10웰)

빨갛게 변한 웰을 표시하고 해석한다.

주의 :

- U.u.의 병리학적 역치는 다음과 같다 : 요도검체의 경우 ≥10⁴CCU/㎖, 최초배뇨물, 정액 및 기관내 검체의 경우 ≥10³CCU/㎖

- 자궁경부에서 ≥10⁴CCU/㎖(역치) M.h.가 존재한다면 이상이 있는 것이다.

(3) 항생제 내성 검사 (4,5,6웰)

내성 판정 : 웰이 빨간색으로 변하면, 균주는 그 웰에 함유된 항생제에 대해 내성이 있음을 나타낸다.

불내성 판정 : 웰이 노란색으로 그대로 유지하면, 균주는 웰에 함유된 항생제로 억제됨을 나타낸다.

주의 :

- 내성검사를 하는 웰은 S.Mh를 함유하지 않고 있다. M.h.에 대해 양성을 나타낼 경우, 48시간 동안 배양 후에 내성에 대해 판정한다.

- 접종물이 표준화되어 있지 않기 때문에 항생제 내성 판정시 정량 결과를 고려해야 한다.

3) 특별한 경우

U.u. 및 M.h. 레벨이 매우 높은 경우 : 트레이의 모든 웰의 내용물이 빤간색으로 변한다. 보다 정확한 결과를 얻기 위해 검체를 희석하는 것이 권고된다.

[희석과정]

- 새로운 UMMt 바이알에 2~8℃로 저장된 원 UMMlyo배양물 200㎕를 접종한다. 냉장고에서 꺼낼 때 변색이 없었는지 확인한다.

- 새로운 UMMlyo 바이알에 접종된 UMMt 바이알 내용물 전체를 넣어 regeneration시킨다.

- 새로운 트레이에 접종한다.

- 희석비율(1:10)을 고려하여 정량결과를 해석한다.

- 필요한 경우, 2-8℃에 보관한 원 UMMlyo 배양물로부터 재분리하여 A7 한천배지에서 마이코플라즈마의 존재를 확인한다.

4) 기타 판독시 고려사항

- 10^6-7CFU/㎖이상의 양으로 존재하고 urease를 갖고 있는 세균이 있는 경우 모든 웰이 오렌지색이 될 수 있다. 이 경우에는 2~8℃에 보관하고 있던 원 UMMlyo 배지를 초콜렛 한천배지에서 재분리함으로서 입증할 수 있다.

- 원 검체가 알칼리성(pH > 8)인 경우 UMM 배지의 색을 변하게 한다. 이 경우에는 새로운 UMM 배지에 검체를 희석(1:10)하여 희석배수를 고려하여 결과를 해석한다.

- 다른 모든 세균 동정 방법과 같이 검체의 질이 시험결과에 영향을 줄 수 있다. 음성결과가 나왔다고 반드시 감염이 없음을 나타내지는 않는다.

- 내성시험은 3가지의 항생제에 대해서만 내성을 예측할 수 있다. 검출된 종의 수(권고수준 : 10^4-5 CCU/㎖)를 고려하여 결과를 평가하도록 충고된다.

- 마이코플라즈마수가 적은 (<10³ CCU/㎖)검체는 웰에서 색깔변화가 무작위적으로 나타날 수 있다.

- Ureaplasma urealyticum 및 Mycoplasma hominis 이외의 마이코플라즈마에 의해 양성반응이 나올수 있으므로 결과를 해석할 때 이를 고려하여야 한다.

마. 품질관리

- 품질관리는 동결건조한 표준균주를 사용한다 (Ureaplasma urealyticum ATCC 27618)

- UMM배지(UMMt+UMMlyo)에 재생된 균주 100㎕를 접종한 다음 예비배양물을 조제한다.

- 37±1℃에서 6시간 배양한다.

- 초기 배양액을 골고루 섞은 후 새로운 UMM배지에 200㎕를 접종한다.

- 마이코패스트에볼루션2 트레이에 접종한 다음 위의 용법용량에 따라 시험한다.

예측되는결과 :

주의 : 동결건조된 균주가 낮은 urease 활성을 나타내는 경우 배양시간을 18~24시간 까지 지속할 수 있다. 배양액에는 예비배양물 20㎕가 접종되어야 한다.