바이오라인 말라리아 항원수출명 : 에스디 바이오라인 말라리아 항원 피.에프(SD BIOLINE Malaria Ag P.f)수출명 : 에스디 바이오라인 말라리아 항원 피.에프/피.브이(SD BIOLINE Malaria Ag P.f/P.v) - 의약품 상세정보

1. 반응원리

1) 나이트로셀룰로스 멤브레인을 solid phase로 하여 검사선 1위치에는 열애열 말라리아 (Plasmodium flaciparum)의 젖산탈수소효소(lactate dehydrogenase, p-LDH)항원에 특이적인 마우스 항체가, 검사선 2위치에는 열대열 말라리아(Plasmodium flaciparum) 및 삼일열 말라리아의 젖산탈수소효소(p-LDH)항원에 특이적인 마우스 항체가 흡착되어 있다.

2) 검체로는 란셋으로 채취한 신선한 전혈을 사용하며 이 전혈을 접합체 웰 내에서 반응용액으로 용혈하여 적혈구내의 말라리아 젖산탈수소효소를 노출시켜 검체 중에 존재하는 말라리아 LDH항원이 1차적으로 접합체 웰에 접합되어 있는 열대열 말라리아 및 삼일열 말라리아 LDH항원에 공통적인 토끼 항체와 반응하게 된다.

3) 이후 이 접합체 웰에 검사용 스트립을 반응시키면 면역크로마토그래피 원리에 의해 검액(LDH항원-접합체 중의 LDH항체 결합물)이 멤브레인을 따라 이동하게 된다.

4) 이때 삼일열 말라리아 양성인 경우에는 검사선 2위치에 흡착되어 있는 마우스 삼일열 및 열대열 말라리아 LDH항체와 반응하며, 그리고 열대열 말라리아 양성인 경우에는 검사선 1의 위치에 흡착되어 있는 마우스 열대열 말라리아 항체 및 검사선 2의 위치에 있는 마우스 열대열 및 삼일열 말라리아 LDH 항체와 2차적으로 반응하면서 항체-항원-항체 복합체를 형성하여 direct-sandwich원리에 의해 보라색으로 발색하게 되어 삼일열 말라리아 및 열대열 말라리아 양성 검체를 감별 진단할 수 있도록 한다.

2. 검체 준비

1) 전혈(whole blood)을 검체로 사용한다.

2) 검체의 준비 방법

(1) 란셋을 이용한 채취

란셋을 사용하여 손가락 등에서 모세혈관의 혈액을 채취하려면 그 부위를 알콜솜으로 소독하고 란셋으로 피부에 피를 낸 후 첨부된 드롭퍼에서 혈액을 직접 채취한다. 드롭퍼의 표시선까지 혈액을 가득 채운후 즉시 사용한다.

(2) 정맥 천자법

가. 정맥천자로 채혈한 혈액을 항응고제(헤파린, 구연산염 또는 EDTA)가 들어있는 튜브에 수집한다. 채혈된 혈액은 즉시 사용하거나 2~8℃에서 보관시 3일간 사용 가능하다.

나. 지방질이 많거나 심하게 용혈된 검체는 쓸 수 없다. 혈구나 혈액 응고 성분 등의 고형물이 있는 검체는 비특이 반응을 유발하므로 가능한 한 쓰지 않는다.

다. 검체 채취시 넣어주는 전형적인 항응고제(EDTA, citrate, 헤파린)는 본 검사법을 방해하지 않는다.

라. 검체는 2~8℃에서 3일 보관이 가능하고 장기간 보관하려면 -20℃에 냉동 보관한다.

3. 검사방법

1) 검사용 스트립 및 기타 모든 구성물은 냉장 보관하였을 경우 실험 시작 15~30분 전에 실온에 둔다.

2) 세척용 마이크로플레이트 웰 프레임에 검사에 필요한 만큼의 접합체 웰을 끼운다.

3) 접합체 웰에 반응용액 1방울 (약 30㎕)씩을 넣고, 세척웰에는 반응용액 4방울 (약120㎕)씩을 넣는다.

4) 신선한 전혈을 첨부된 dropper로 채취하여 1방울 (약20㎕)을 3)의 접합체 웰에 떨어뜨리고 이 드로퍼 위의 편평한 부분으로 웰 내에서 잘 혼합한다. (용혈반응)

5) 1분 후 4)의 접합체웰에 검사용 스트립을 멤브레인이 아래방향으로 가도록 수직으로 넣고 5분간 반응시킨다.(용혈된 검액이 멤브레인을 따라 상부로 이동한다.)

6) 5분 경과 후 검사용 스트립을 세척웰로 옮긴다. (세척반응 시작 : 검사용 스트립의 멤브레인이 점차 백색으로 세척되어 가면서 대조선, 검사선이 나타나는 것을 관찰할 수 있다.)

7) 세축반응 개시후 10~15분이 되면 검사용 스트립을 꺼내어 결과를 판독한다.

[검사방법요약표]

반응용액을 접합체웰(1방울) 및 세척웰(4방울)에 떨어뜨린다.

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Dropper로 혈액을 채취하여 1방울을 접합체웰에 떨어뜨린다.

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검사용스트립을 꺼내어 접합체웰에서 5분간 반응시킨다.

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검사용스트립을 세척웰로 옴겨서 10~15분간 세척한다.

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결과판독

→ Pf양성일 경우 C,T1,T2밴드 발색

→ Pv양성일 경우 C,T2밴드만 발색

→ 음성일 경우 C밴드만 발색

4. 정도 관리

모든 검사 결과는 대조선(C)에 보라색 선이 나타나야 한다.

5. 결과의 판정(아래 그림 참조)

1) 음성 : 대조선(C)위치에 한 밴드만 나타나는 경우

2) 삼일열 말라리아(P,v)양성 : 대조선(C)과 검사선(2)위치에 두밴드가 나타나는 경우

3) 열대열 말라리아(P,f)양성 : 대조선(C)과 검사선(1),(2)위치에 두 밴드가 나타나는 경우

4) 재시험 : 어떠한 밴드도 나타나지 않는 경우

⚫ 대조선에 밴드가 나타나지 않으면 검사가 잘못된 경우 또는 시약의 품질에 문제가 있을 가능성이 있으므로 이 검사는 무효화시키고, 새루운 시약으로 재시험한다.

⚫ 대조선에 밴드가 나타나지 않는 경우는 검체량 부족 등의 조작상의 미숙일 수 있으므로 재시험 한다.

6. 결과의 해석

1) 양성 : 본 제제의 검사결과가 양성인 경우 말라리아 항원이 존재하는 것으로 판단할 수 있다. 단, 본 제제는 1차 검사용으로 사용하여야 하며, 양성판정된 검체는 재검하여 재검 결과를 확인하고, 이 검사의 결과와 함게 전문가의 자세한 문진을 통하여 다른 임상 결과나 실험결과를 함께 이용하여 진단을 내려야 한다.

2) 음성 : 본 제제의 검사결과가 음성인 경우 말라리아 항원이 존재하지 않는 것으로 판단할 수 있다.