디아키프리에스트리올엘라이자 - 의약품 상세정보

1) 검체 준비

혈청을 검체로 사용하나 지방질이 많거나 심하게 용혈 된 검체는 쓸 수 없다. 검체는 2~8℃에서 1~2일 보관이 가능하고 더 장기간 보관하려면 -20℃에 냉동 보관한다. 실험에 필요한 검체의 최소 volume은 50㎕이다.

2) 기질액 준비

사용하고자 하는 웰 수에 따라 기질액을 기질용 완충액으로 희석하며, 이 때 기질액 : 기질용 완충액을 1:1로 한다. 즉, 기질액 1mL에 기질용 완충액 1mL를 넣어 희석한다.

3) 세척액 준비

시험을 시작하기 전 상온에 방치하여 완전히 용해된 20배 농축 세척액을 정제수로 희석하여 필요한 만큼의 세척액을 준비한다. 즉, 농축 세척액 50mL에 정제수 950mL을 넣어 희석한다. 세척액은 실온에서 약 30일간 안전하며, 60일 이상 장기보존 시는 2~8℃에 보관하는 것이 안정하다.

- 시약을 약 30분전에 실온에서 예열시키며 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용한다.
- 시험 후 남은 플레이트는 첨부된 비닐포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2~8℃에서 냉장 보관한다.
  각 시약의 유효 기간은 각각의 병에 표기되어 있다.
- 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후 사용한다.

가. 검사법

1) 각 검사 시, 표준액 농도별로 3개, 정도관리혈청 농도별 3개와 검사하고자 하는 검체 수를 결정 한 후 원하는 웰 만큼 스트립을 홀더에 끼운다. 이때 사용하지 않은 웰 들은 자체 밀봉지에 방습제와 함께 밀봉하여 2~8℃에 보관하며 스트립의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 않도록 주의한다.

2) 표준액, 정도관리혈청과 검체들은 웰에 가한 위치를 정하여 기록을 한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰들에 50㎕의 표준액과 검체를 분주한다.

3) 기질 blank를 제외한 모든 웰에 에스트리올 항체액 50㎕를 분주한 후 플레이트 밀봉 테이프로 밀봉한다.

4) 37℃(±1℃)에서 1시간동안 반응시킨다.

5) 반응 후, 밀봉시킨 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들을 세척액으로 웰을 완전히 채워 4회 세척한 후, 웰 내에 잔류액을 완전히 제거한다. 이 때 첫 번째 세척단계에서 각 웰의 내용물을 흡입장치로 완전제거 후 세척액을 가하고 옆 웰로 넘어 들어가지 않도록 주의하면서 나머지 3회 세척단계에서도 세척액이 웰을 완전히 채우도록 하여 세척한다.

6) 모든 웰에 접합체액 100㎕를 분주 한 후 플레이트 밀봉테이프로 밀봉한다.

7) 37℃(±1℃)에서 30분(±5분) 동안 반응시킨다.

8) 반응 후, 밀봉시킨 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들을 세척액으로 웰을 완전히 채워 4회 세척한 후, 웰 내에 잔류액을 완전히 제거한다. 이 때 첫 번째 세척단계에서 각 웰의 내용물을 흡입장치로 완전제거 후 세척액을 가하고 옆 웰로 넘어 들어가지 않도록 주의하면서 나머지 3회 세척단계에서도 세척액이 웰을 완전히 채우도록 하여 세척한다.

9) 제조된 기질액을 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

10) 잘 혼합한 후 15~30℃, 암소에서 20분(±1분) 동안 반응한다.

11) 반응 정지액을 모든 웰에 100㎕씩 분주한다.

12) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 450nm에서 흡광도(O.D)를 측정한다. 만약 이 중 파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 보조파장(reference) 620nm 또는 405nm 로 맞추어 사용한다.

<검사과정 요약>

1) 각 표준액과 검체에 대한 O.D 값을 계산한다.

2) 그래프의 X축을 표준액의 농도(ng/ml)로, Y축을 표준액의 흡광도 값(O.D)으로 하여 표준곡선을 그린다. 이때 표준곡선은 표준액 농도에 해당하는 O.D 값의 점과 점 사이를 직선으로 연결(Point to Point)하여 그린다.

3) 표준곡선을 이용하여 시료의 O.D값에 대한 농도 값을 구한다. 이때 정도관리 혈청의 농도는 0.8~1.2 ng/ml과 9~13ng/ml 범위에 포함되어야 한다.

4) 결과해석 : 임신주수별로 uE3농도가 증가하는 경향을 보이는 주수별 정상범위 값보다 급격히 낮은 값을 보이는 검체에 대해서는 재검을 요하며 재검사 결과가 동일하게 나타날 경우 전문의에 의하여 판정한다.

5) 정상치 범위

6) 측정가능 범위는 0.2ng/ml ~ 40ng/ml까지 이며, 검출한계 농도(정량 한계)값은 0.2ng/ml 이다.

7) 타 호르몬에 대한 비특이 반응시험을 실시한 결과 Estriol 호르몬 에서는 100%의 교차 반응을 보이고, Estadiol-17β 호르몬에서는 0.48% 이하를 보이며 나머지 Testosterone, DHT, Estrone, DHEA, Progesterone, Cortisol, Ethynlestradiol, 11-deoxycort. 호르몬에서는 0.01% 이하의 교차 반응을 보이는 것을 확인할 수 있다.

● 임상적 의의

에스트리올(E3)은 Estrogen의 일종으로 임신 진행과 더불어 모체 혈중 Estrogen은 증가한다. 임신초기 에스트리올(E3)은 Estrogen의 30%, 후반에는 90%를 차지하고 혈중에서는 주로 포합형으로 존재하며 혈중 에스트리올(E3)은 태반중량, 출산체중, 태아 신장과 상관성이 있다. 태아 태반계 기능이 저하되면 에스트리올(E3)은 감소하여 중증 임신중독증, 자궁내 태아 발육지연에서 에스트리올(E3)는 저농도를 보이고, 태아의 예후와도 상관성을 보이므로 에스트리올(E3)은 임신중독증의 중증화, 잠재 태아 가사(Fetal asphyxia) 예측에 도움이 된다. 또한 무뇌아 임신, 자궁내 태아 사망, dexamethasone이나 betamethasone 투여, 태반 sulfatase 결손증, 태반 aromatase 결손증에서도 에스트리올(E3)은 감소한다. 그러므로 에스트리올(E3)의 검사는 태아와 산모 상태를 알 수 있는 유효한 검사이다. 그러나 포합형 에스트리올(E3)은 합병증이 있는 임산부, 간 또는 신장 기능 이상(신장염, 신장기능 장애)이 있는 임산부, 경증 당뇨병을 합병한 임산부, Rh 혈액형 부적합 임신에서는 정상적으로 나타나기도 하므로 이러한 특이 상황에도 영향을 받지 않는 비포합형 에스트리올(E3)의 양을 측정함으로써 태아 태반 기능의 가장 좋은 지표로 사용할 수 있다.

● 반응원리

당사 디아키 프리 에스트리올(uE3)제품은 경쟁반응을 기초로한 효소면역 진단방법이다. 소혈청 알부민에 에스트리올(E3) 항원을 접합시킨 접합체 액을 마이크로 플레이트(plate)에 분주하여 소혈청 알부민-에스트리올(BSA-E3) 항원을 접합고정시키고 이 고정된 항원은 검체에 들어있는 항원과 경쟁적으로 Rabbit anti-Estriol-6-BSA 항체액과 접합한다. 결합되지 않는 물질은 세척과정을 통하여 깨끗이 제거된다. 접합된 항원-항체 물질에 Anti rabbit IgG peroxidase conjugate인 항체가 접합되어 항원-항체¨항체로 결합되고 이는 Spectrophotometer로 흡광도(O.D)값을 측정한다. 이 반응 원리는 경쟁반응 이므로 검체 속 항원량에 반비례한다.

※ 아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 단순한 실례이므로 실제 실험 치로 적용해서는 안 된다.

① 실험결과

② 표준 곡선 그래프