| 성상 | 1. 항 B형 간염바이러스 e항체 흡착플레이트 : 무색의 폴리스티렌 플레이트이다. 2. 음성대조액 : 담황색의 액상제제이다. 3. 항-B형 간염바이러스 e 항원 양성대조액 : 담황색의 액상제제이다. 4. 항-B형 간염바이러스 e항원 양성대조액 : 담황색의 액상제제이다. 5. 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e항체액 : 담황색의 액상제제이다. 6. 효소표지 항체 희석액 : 담황색의 액상제제이다. 7. 중화제 : 담황색의 액상제제이다. 8. 농축세척액 : 무색의 액상제제이다. 9. 기질액 : 연한 황새의 액상제제이다. 10. 기질용 완충액 : 무색의 액상제제이다. |
|---|---|
| 업체명 | (주)녹십자엠에스 |
| 전문/일반 | 전문의약품 |
| 허가일 | 2005-01-31 |
| 품목기준코드 | 200503831 |
| 표준코드 | 8806774010908, 8806774010915, 8806774010922, 8806774010939 |
총량 : 1병 중 1밀리리터/병 - 항-B형 간염자이러스 e항원 양성대조액 | 성분명 : 사람항비형간염바이러스이항원양성혈청 | 분량 : 1 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 20밀리리터/병 - 기질용 완충액 | 성분명 : 과산화수소수 | 분량 : 0.006 | 단위 : 용량백분율 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 2밀리리터/병 - B형 간염바이러스 e항원 양성대조액 | 성분명 : B형간염이항원양성혈청 | 분량 : 2 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 20밀리리터/병 - 반응정지액 | 성분명 : 1ㆍ6N황산 | 분량 : 20 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 0.4밀리리터/병 - 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e항체액 | 성분명 : 효소표지마우스단클론항비형간염이항체 | 분량 : 60 | 단위 : 마이크로그램 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 : (Murine monoclonal anti-HBe HRP)
총량 : 1병 중 0.3밀리리터/병 - 기질액 | 성분명 : TMB(Tetramethyl benzidine) | 분량 : 3.0 | 단위 : 밀리그램 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 7밀리리터/병 - 중화제 | 성분명 : B형간염이항원양성혈청 | 분량 : 3.5 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 2밀리리터/병 - 음성대조액 | 성분명 : 사람비형간염바이러스이항원및항체음성혈청 | 분량 : 2 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : (96wells/플레이트)x1개 - 항-B형간염바이러스E항체흡착플레이트(96wells/플레이트)x1개 | 성분명 : 사람항비형간염바이러스이항체 | 분량 : 19.2 | 단위 : 마이크로그램 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 12밀리리터/병 - 효소표지항체 희석액 | 성분명 : 인산염완충액 | 분량 : 6 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
총량 : 1병 중 50밀리리터/병 - 농축세척액 | 성분명 : 인산염완충액 | 분량 : 50 | 단위 : 밀리리터 | 규격 : . | 성분정보 : | 비고 :
혈장이나 혈청중의 B형 간염바이러스 e항원 및 항-B형 간염바이러스 e항체의 검출
1. 시약의 조제
1) 모든 시약은 실험시작 15 ~ 30분전에 실온에 둔다.
2) 검체의 처리
검체는 가급적 용혈되지 않게 준비하고 육안으로 관찰되는 입자형 부유물등은 원심분리하여 제거한다.
3) 밀봉된 항B형 간염바이러스 e항체 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 제외하고 나머지 Strip은 Frame에서 빼내어 첨부된 비닐포에 실리카겔과 함께 넣어 2 ~ 8℃에 보관한다. 이때 보관중인 비닐포내에 습기가 들어가면 항체 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.
4) 세척액의 조제
검체의 수량에 따라 필요한 만큼의 농축세척액(8번병)을 증류수로 21배 희석하여 직사광선을 피하여 보관한다. (농축세척액 50㎖을 증류수 1000㎖에 희석한다.)
5) 효소표지항체액의 조제
효소표지항체액은 사용하기 10-20분 전에 조제한다. 농축효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e 항체액(5번병)을 효소표지항체 희석액(6번병)으로 필요한 양만큼 1:50의 비율로 희석하여 직사광선을 피하여 보관한다.
(1 Strip당 40㎕의 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e 항체액을 2ml의 효소표지항체희석액으로 희석한다.)
6) 기질액의 조제
기질액은 사용하기 10-20 분전에 조제한다.
기질액과 기질용 완충액을 1 : 100(101배)의 비율로 희석하여 직사광선을 피하여 보관한다. (실험시 1 Strip(8 well)당 기질액 20㎕에 기질용완충액 2㎖를 혼합하여 조제한다.)
* 기질액은 냉장에서 얼어 있으니 반드시 37℃ 수조에서 녹여 균질화 한 후 사용하여야 한다. (기질액의 융점 18℃)
2. 시약의 보관조건 및 보존기간
가. 조제한 시약의 보관조건 및 보존기간
| 조 제 시 약 |
보 관 조 건 |
보 존 기 간 |
| 효소표지항체액 |
2 ~ 8 ℃ |
4 시간 |
| 세척액 |
2 ~ 8 ℃ |
4 주 |
| 기질액 |
2 ~ 8 ℃ |
1 시간 |
나. 개봉된 시약의 보관조건 및 보존기간
가) 밀봉된 모든 시약은 2-8℃에서 제조일로부터 1년간 안정하다.
나) 한번 개봉된 시약은 시약병을 닫은 다음 아래와 같이 보관한다.
| 시약명 |
보관조건 |
보존기간 |
| 항-B형 간염바이러스 e항체 흡착 플레이트 |
2 ~ 8 ℃ |
2 개월 |
| 음성 대조액 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| B형 간염바이러스 e항원 양성 대조액 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| 항-B형 간염바이러스 e항원 양성 대조액 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| 농축효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e 항체액 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| 효소표지항체 희석액 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| 중화제 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| 농축세척액 |
실온/2 ~ 8 ℃ |
2개월/4개월 |
| 기질액 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| 기질용 완충액 |
2 ~ 8 ℃ |
3 개월 |
| 반응정지액 |
실온 |
6 개월 |
3. 시험방법
3-1. B형 간염바이러스 e항원 (HBeAg)의 검사법
1) 농축세척액(8번병) 50㎖을 증류수 1000㎖에 희석한다.
2) 검사할 시료와 음성대조액(2번병) 및 양성대조액(3번병)을 준비한다.
3) 준비된 검체를 항B-형 간염바이러스 e항체가 흡착된 플레이트의 각 well에 100㎕씩 분주한다. 이때 음성대조액은 3 wells, 양성대조액은 2 wells를 사용한다. 플레이트를 Sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.
4) 각 well의 내용물을 모두 흡인해내고 세척액으로 5회 세척한다. (1회에 각 well당 250㎕ 이상)
5) 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e 항체액(5번병)을 효소표지항체 희석액(6번병)으로 1:50의 비율로 희석하여 조제하고, 조제한 효소표지항체액을 각 well에 100㎕씩 넣고 플레이트를 Sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.
6) 4)항과 동일한 방법으로 5회 세척한다.
7) 기질액(9번병)과 기질용 완충액(10번병)을 필요한 만큼 1:100의 비율로 혼합하여 조제하고, 조제한 기질액을 각 well에 100씩 넣는다.
8) 차광된 상태의 실온(15-30℃)에서 30분간 방치한다.
9) 반응정지액(11번병)을 각 well에 100㎕씩 넣는다.
10) ELISA 흡광측정기를 사용하여 450nm파장에서 각 well의 흡광도를 측정한다. (이 때 참조파장은 620nm를 사용할 수 있다.)
3-2. 항B형 간염바이러스 e항체 (Human anti-HBe)의 검사법
1) 농축세척액(8번병) 50㎖을 증류수 1000㎖에 희석한다.
2) 검사할 시료와 음성대조액(2번병) 및 양성대조액(4번병)을 준비한다.
3) 준비된 검체를 항-B형 간염바이러스 e항체가 흡착된 플레이트의 각 well에 50㎕씩 분주한다. 이때 음성대조액 3 wells, 양성대조액은 2 wells를 사용한다. 각 well에 중화제(7번병)을 50㎕씩 첨가한다. 플레이트를 sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.
4) 각 well의 내용물을 모두 흡인해내고 세척액으로 5회 세척한다. (1회에 각 well당 250㎕ 이상)
5) 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e항체액(5번병)을 효소표지항체 희석액(6번병)으로 1:50의 비율로 희석하여 조제하고, 조제한 효소표지 항체액을 각 well에 100㎕씩 넣고 플레이트를 sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.
6) 4)항과 동일한 방법으로 5회 세척한다.
7) 기질액(9번병)과 기질용 완충액(10번병)을 필요한 만큼 1:100의 비율로 혼합하여 조제하고, 조제한 기질액을 각 well에 100㎕씩 넣는다.
8) 차광된 상태의 실온(15-30℃)에서 30분간 방치한다.
9) 반응정지액 (11번병)을 각 well에 100㎕씩 넣는다.
10) ELISA 흡광측정기를 사용하여 450nm 파장에서 각 well의 흡광도를 측정한다.
(이때 참조파장은 620nm를 사용할 수 있다.)
4. 결과판정
4-1. B형 간염바이러스 e항원 검사의 결과판정
4-1-1. 음성대조액 평균흡광도값 (NCx) 계산
음성대조액을 넣은 3 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 3으로 나눈 값을 평균 음성 흡광도로 정한다.
4-1-2. 음성대조액의 흡광도값은 0.000이상 0.300이하이어야 한다.
4-1-3. 양성대조액 평균흡광도값(PCx) 계산
양성대조액을 넣은 2 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 2으로 나눈 값을 평균 양성 흡광도로 정한다.
4-1-4. 양성대조액의 흡광도값은 0.600 이상 2.500 이하이어야 한다.
4-1-5. 판정기준치(Cut off Value)의 계산
판정기준치는(NCx + PCx) ×0.25로 정하며, 판정기준치 이상의 흡광도를 보이는 검체를 양성으로, 미만의 흡광도를 보이는 검체는 음성으로 판정한다.
<예> Cut off Value = (0.165+1.588)×0.25 = 0.438
4-1-6. 정도관리
PCx - NCx의 값이 0.3 이상이면 실험이 잘된 것으로 인정하며, 만일 그 값이 0.3 미만일 경우 검사를 다시 실시한다.
4-1-7. 재검사의 범위
검체의 흡광도가 판정기준치의 ±10% 이내에 속할 때는 재검사를 실시하여 재검사결과를 최종검사 결과로 한다. 즉, 재검사의 결과가 양성결과를 보이면 양성으로, 음성결과를 보이면 음성으로 판정한다.
4-2. 항-B형 간염바이러스 e항체 검사의 결과판정
4-2-1. 음성대조액 평균흡광도값 (NCx) 계산
음성대조액을 넣은 3 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 3으로 나눈 값을 평균 음성 흡광도로 정한다.
4-2-2. 음성대조액의 흡광도값은 0.600이상 2.500이하이어야 한다.
4-2-3. 양성대조액 평균흡광도값(PCx) 계산
양성대조액을 넣은 2 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 2으로 나눈 값을 평균 양성 흡광도로 정한다.
4-2-4. 양성대조액의 흡광도값은 0.000 이상 0.300 이하이어야 한다.
4-2-5. 판정기준치(Cut off Value)의 계산
판정기준치는(NCx + PCx) ×0.5로 정하며, 판정기준치 이상의 흡광도를 보이는 검체를 음성으로, 미만의 흡광도를 보이는 검체는 양성으로 판정한다.
<예> Cut off Value = (1.548+0.181)×0.5 = 0.864
4-2-6. 정도관리
NCx - PCx의 값이 0.3 이상이면 실험이 잘된 것으로 인정하며, 만일 그 값이 0.3 미만일 경우 검사를 다시 실시한다.
4-2-7. 재검사의 범위
검체의 흡광도가 판정기준치의 ±10% 이내에 속할 때는 재검사를 실시하여 재검사결과를 최종검사 결과로 한다. 즉, 재검사의 결과가 양성결과를 보이면 양성으로, 음성결과를 보이면 음성으로 판정한다.
1. 체외 진단용으로만 사용한다.
2. 혈청은 가능한한 신선한 것이어야 한다.
3. 본 Kit의 시약은 반드시 2-8℃에서 보관하며, 동결을 금해야 한다.
4. 각 시약은 인체의 피부접촉을 금하며 접촉시에는 흐르는 물에 세척한다.
5. Kit의 액체시약은 보관중 결정이 형성될 수 있으며, 이 때는 37℃에서 흔들어 녹여 사용한다.
6. 흡착플레이트 중 사용하고 남은 Strips는 은박포 및 비닐포에 공기유통이 없도록 완전 밀봉하여 보관한다.
7. 본 흡착플레이트는 본 키트와 동일한 시약에만 사용할 수 있다.
8. 시약의 뚜껑을 열거나 내용물을 꺼낼 때 미생물에 오염되지 않도록 주의한다.
9. 검체는 미지의 바이러스 등의 감염을 배제할 수 없으므로 취급에 주의한다.
10. 용혈이 심하거나, 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으니 주의한다.
| 저장방법 | 2-8℃보관 |
|---|---|
| 사용기간 | 제조일로부터 12 개월 |
| 재심사대상 | |
| RMP대상 | |
| 포장정보 | 시약명 96T 192T 480T 항-B형 간염바이러스 e항체 흡착플레이트(96wells:16wells*6) 1개x96wells 2개x96wells 5개x96wells 음성대조액 1병(2ml/병) 1병(4ml/병) 1병(10ml/병) B형 간염바이러스 e항원양성 대조액 1병(2ml/병) 1병(4ml/병) 1병(10ml/병) 항-B형 간염바이러스 e항원 양성 대조액 1병(1ml/병) 1병(2ml/병) 1병(5ml/병) 농축 효소표지 마우스 단일클론항 -B형 간염바이러스 e항체액 1병(0.4ml/병) 1병(0.8ml/병) 1병(2ml/병) 접합체액 효소표지항체 희석액 1병(12ml/병) 1병(24ml/병) 1병(60ml/병) 중화제 1병(7ml/병) 1병(14ml/병) 1병(35ml/병) 농축세척액 2병(25ml/병) 2병(50ml/병) 2병(100ml/병) 기질액 1병(0.3ml/병) 1병(0.6ml/병) 1병(1.5ml/병) 기질용완충액 1병(20ml/병) 1병(40ml/병) 1병(100ml/병) 반응정지액 1병(20ml/병) 1병(40ml/병) 1병(100ml/병) |
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