제네디아 에취비이 엘리자(Genedia HBe ELISA) - 의약품 상세정보

1) 모든 시약은 실험시작 15 ～ 30분전에 실온에 둔다.

2) 검체의 처리

검체는 가급적 용혈되지 않게 준비하고 육안으로 관찰되는 입자형 부유물등은 원심분리하여 제거한다.

3) 밀봉된 항B형 간염바이러스 e항체 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 Strip을 제외하고 나머지 Strip은 Frame에서 빼내어 첨부된 비닐포에 실리카겔과 함께 넣어 2 ～ 8℃에 보관한다. 이때 보관중인 비닐포내에 습기가 들어가면 항체 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

4) 세척액의 조제

검체의 수량에 따라 필요한 만큼의 농축세척액(8번병)을 증류수로 21배 희석하여 직사광선을 피하여 보관한다. (농축세척액 50㎖을 증류수 1000㎖에 희석한다.)

5) 효소표지항체액의 조제

효소표지항체액은 사용하기 10-20분 전에 조제한다. 농축효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e 항체액(5번병)을 효소표지항체 희석액(6번병)으로 필요한 양만큼 1:50의 비율로 희석하여 직사광선을 피하여 보관한다.

(1 Strip당 40㎕의 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e 항체액을 2ml의 효소표지항체희석액으로 희석한다.)

6) 기질액의 조제

기질액은 사용하기 10-20 분전에 조제한다.

기질액과 기질용 완충액을 1 : 100(101배)의 비율로 희석하여 직사광선을 피하여 보관한다. (실험시 1 Strip(8 well)당 기질액 20㎕에 기질용완충액 2㎖를 혼합하여 조제한다.)

* 기질액은 냉장에서 얼어 있으니 반드시 37℃ 수조에서 녹여 균질화 한 후 사용하여야 한다. (기질액의 융점 18℃)

가. 조제한 시약의 보관조건 및 보존기간

나. 개봉된 시약의 보관조건 및 보존기간

가) 밀봉된 모든 시약은 2-8℃에서 제조일로부터 1년간 안정하다.

나) 한번 개봉된 시약은 시약병을 닫은 다음 아래와 같이 보관한다.

3-1. B형 간염바이러스 e항원 (HBeAg)의 검사법

1) 농축세척액(8번병) 50㎖을 증류수 1000㎖에 희석한다.

2) 검사할 시료와 음성대조액(2번병) 및 양성대조액(3번병)을 준비한다.

3) 준비된 검체를 항B-형 간염바이러스 e항체가 흡착된 플레이트의 각 well에 100㎕씩 분주한다. 이때 음성대조액은 3 wells, 양성대조액은 2 wells를 사용한다. 플레이트를 Sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

4) 각 well의 내용물을 모두 흡인해내고 세척액으로 5회 세척한다. (1회에 각 well당 250㎕ 이상)

5) 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e 항체액(5번병)을 효소표지항체 희석액(6번병)으로 1:50의 비율로 희석하여 조제하고, 조제한 효소표지항체액을 각 well에 100㎕씩 넣고 플레이트를 Sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

6) 4)항과 동일한 방법으로 5회 세척한다.

7) 기질액(9번병)과 기질용 완충액(10번병)을 필요한 만큼 1:100의 비율로 혼합하여 조제하고, 조제한 기질액을 각 well에 100씩 넣는다.

8) 차광된 상태의 실온(15-30℃)에서 30분간 방치한다.

9) 반응정지액(11번병)을 각 well에 100㎕씩 넣는다.

10) ELISA 흡광측정기를 사용하여 450nm파장에서 각 well의 흡광도를 측정한다. (이 때 참조파장은 620nm를 사용할 수 있다.)

3-2. 항B형 간염바이러스 e항체 (Human anti-HBe)의 검사법

1) 농축세척액(8번병) 50㎖을 증류수 1000㎖에 희석한다.

2) 검사할 시료와 음성대조액(2번병) 및 양성대조액(4번병)을 준비한다.

3) 준비된 검체를 항-B형 간염바이러스 e항체가 흡착된 플레이트의 각 well에 50㎕씩 분주한다. 이때 음성대조액 3 wells, 양성대조액은 2 wells를 사용한다. 각 well에 중화제(7번병)을 50㎕씩 첨가한다. 플레이트를 sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

4) 각 well의 내용물을 모두 흡인해내고 세척액으로 5회 세척한다. (1회에 각 well당 250㎕ 이상)

5) 농축 효소표지 마우스 단일클론 항-B형 간염바이러스 e항체액(5번병)을 효소표지항체 희석액(6번병)으로 1:50의 비율로 희석하여 조제하고, 조제한 효소표지 항체액을 각 well에 100㎕씩 넣고 플레이트를 sealer로 잘 밀봉한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

6) 4)항과 동일한 방법으로 5회 세척한다.

7) 기질액(9번병)과 기질용 완충액(10번병)을 필요한 만큼 1:100의 비율로 혼합하여 조제하고, 조제한 기질액을 각 well에 100㎕씩 넣는다.

8) 차광된 상태의 실온(15-30℃)에서 30분간 방치한다.

9) 반응정지액 (11번병)을 각 well에 100㎕씩 넣는다.

10) ELISA 흡광측정기를 사용하여 450nm 파장에서 각 well의 흡광도를 측정한다.

(이때 참조파장은 620nm를 사용할 수 있다.)

4-1. B형 간염바이러스 e항원 검사의 결과판정

4-1-1. 음성대조액 평균흡광도값 (NCx) 계산

음성대조액을 넣은 3 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 3으로 나눈 값을 평균 음성 흡광도로 정한다.

4-1-2. 음성대조액의 흡광도값은 0.000이상 0.300이하이어야 한다.

4-1-3. 양성대조액 평균흡광도값(PCx) 계산

양성대조액을 넣은 2 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 2으로 나눈 값을 평균 양성 흡광도로 정한다.

4-1-4. 양성대조액의 흡광도값은 0.600 이상 2.500 이하이어야 한다.

4-1-5. 판정기준치(Cut off Value)의 계산

판정기준치는(NCx + PCx) ×0.25로 정하며, 판정기준치 이상의 흡광도를 보이는 검체를 양성으로, 미만의 흡광도를 보이는 검체는 음성으로 판정한다.

<예> Cut off Value = (0.165+1.588)×0.25 = 0.438

4-1-6. 정도관리

PCx - NCx의 값이 0.3 이상이면 실험이 잘된 것으로 인정하며, 만일 그 값이 0.3 미만일 경우 검사를 다시 실시한다.

4-1-7. 재검사의 범위

검체의 흡광도가 판정기준치의 ±10% 이내에 속할 때는 재검사를 실시하여 재검사결과를 최종검사 결과로 한다. 즉, 재검사의 결과가 양성결과를 보이면 양성으로, 음성결과를 보이면 음성으로 판정한다.

4-2. 항-B형 간염바이러스 e항체 검사의 결과판정

4-2-1. 음성대조액 평균흡광도값 (NCx) 계산

음성대조액을 넣은 3 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 3으로 나눈 값을 평균 음성 흡광도로 정한다.

4-2-2. 음성대조액의 흡광도값은 0.600이상 2.500이하이어야 한다.

4-2-3. 양성대조액 평균흡광도값(PCx) 계산

양성대조액을 넣은 2 wells의 발색으로 인한 흡광도의 합을 2으로 나눈 값을 평균 양성 흡광도로 정한다.

4-2-4. 양성대조액의 흡광도값은 0.000 이상 0.300 이하이어야 한다.

4-2-5. 판정기준치(Cut off Value)의 계산

판정기준치는(NCx + PCx) ×0.5로 정하며, 판정기준치 이상의 흡광도를 보이는 검체를 음성으로, 미만의 흡광도를 보이는 검체는 양성으로 판정한다.

<예> Cut off Value = (1.548+0.181)×0.5 = 0.864

4-2-6. 정도관리

NCx - PCx의 값이 0.3 이상이면 실험이 잘된 것으로 인정하며, 만일 그 값이 0.3 미만일 경우 검사를 다시 실시한다.

4-2-7. 재검사의 범위

검체의 흡광도가 판정기준치의 ±10% 이내에 속할 때는 재검사를 실시하여 재검사결과를 최종검사 결과로 한다. 즉, 재검사의 결과가 양성결과를 보이면 양성으로, 음성결과를 보이면 음성으로 판정한다.