제네디아 에취아이브이 항원-항체 엘리자 - 의약품 상세정보

1) 사람 혈장 또는 혈청을 검체로 사용하며, 혈구나 혈액 응고 성분 등의 고형물을 원심분리하여 완전히 제거한다.

2) 열처리된 검체는 위음성 반응이나 위양성 반응이 일어날 수 있으므로 사용하지 않는다.

1) 모든 시약은 실험시작 15~30분전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 마이크로 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 스트립을 꺼내고 보관하고자 하는 스트립은 Frame에서 빼내어 첨부된 은박포에 실리카겔과 함께 넣어 2~8℃에 보관한다. 이때 보관중인 은박포내에 습기가 들어가면 항원 및 항체 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축세척액을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. (필요한 세척액량이 200㎖일 경우 농축세척액 10㎖에 증류수나 이온정제수 190㎖을 넣어 총부피가 200㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.)

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37±1℃ 항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

4) 접합체액의 조제

사용하기 5~10분전에 농축접합체액을 접합체희석액으로 51배의 비율로 필요한 양만큼 희석한다. (실험시 1 Strip (8 well)당 농축접합체액 20 ㎕에 접합체희석액 1㎖을 혼합하여 조제한다.)

접합체희석액은 침전이 있을 수 있으니 충분히 혼합하여 사용한다.

5) 기질액의 조제

사용하기 5~10분전에 기질액과 기질용완충액을 101배의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 사용한다. (실험시 1 Strip (8wells) 당 기질액 10㎕에 기질용완충액 1㎖을 혼합하여 조제한다.) 혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다.

기질액은 냉장에서 얼어 있으니 반드시 37±1℃ 수조에서 녹여 균질화 한 후 사용하여야 한다. (기질액의 어는점 18℃)

1) 시험에 필요한 양 만큼 Strip을 꺼내어 Frame에 고정시킨다.

2) 마이크로 플레이트의 각 well에 음성대조액을 100㎕씩 4 wells, 항체양성대조액을 100㎕씩 2 wells, 항원양성대조액을 100㎕씩 2 wells, 나머지 wells에 검체를 각각 100㎕씩 차례대로 넣는다. (자동화기기 결과판독 프로그램에 따라, 음성대조액을 3wells, 항체 및 항원 양성대조액을 각각 1 well씩 사용할 수도 있다.)

3) 마이크로 플레이트를 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한 다음 37±1℃에서 60분간 반응시킨다.

4) 3)의 반응이 끝나기 5 ~ 10분 전에 2. 시약의 준비, 4)접합체액의 조제 항에 따라 농축접합체액을 접합체희석액으로 51배의 비율로 필요한 만큼 희석한다.

5) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다. (300~400㎕/well/회)

6) 세척된 마이크로 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 4)에서 조제된 접합체액을 각 well에 100㎕씩 넣는다.

7) 마이크로 플레이트를 밀봉테이프로 잘 밀봉한 후 37±1℃에서 30분간 반응시킨다.

8) 7)의 반응이 끝나기 5-10분전에 2. 시약의 준비, 5)기질액의 조제 항에 따라 기질액을 기질용완충액으로 101배의 비율로 필요한 만큼 희석하여 기질액을 조제한다.

9) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다. (300~400㎕/well/회)

10) 세척된 마이크로 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 8)에서 조제한 기질액을 각 well에 100㎕씩 넣고 실온에서 30분간 반응시킨다. 이 반응은 직사광선을 피하여 실시한다.

11) 반응정지액 (9번병)을 100㎕씩 넣고 마이크로 플레이트를 가볍게 쳐서 발색물을 균질화한다.

12) 공기를 맹검 (air blank) 으로하고 음성대조액, 양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다. 흡광도는 반응정지액 (9번병)을 넣은 후 30분 이내에 측정하며, 측정파장 450nm, 참조파장은 620 ~ 650nm로 한다. (참조 파장이 없는 경우, 측정파장으로만 측정하여도 됨)

항체 양성대조액 및 항원양성대조액의 흡광도값이 모두 1.000 이상이고, 음성대조액의 흡광도값을 모두 0.100 이하이어야 한다. 음성대조액 흡광도값 중 1개의 값이 0.000 ～ 0.100 범위를 벗어난 경우에는 그 값을 제외하고 평균값을 산출한다. 만약 흡광도값이 -0.005 ~ 0.000 사이로 읽혔다면 계산시 0.000으로 처리한다. 만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 시험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 재시험을 실시한다.

1) 판정기준치 (Cut off Value) 산출

가. 음성대조액의 평균흡광도값을 구한다.

예) 음성대조액 1의 흡광도 = 0.045

음성대조액 2의 흡광도 = 0.043

음성대조액 3의 흡광도 = 0.044

음성대조액 4의 흡광도 = 0.046

음성대조액의 평균흡광도값 (NCx) = (0.045＋0.043＋0.044＋0.046)/4 = 0.045

* 음성대조액을 3개 사용할 경우, 3개의 평균흡광도값을 구한다.

나. 판정기준값의 계산

판정기준값 (Cut off value) = NCx＋0.200

= 0.045＋0.200

= 0.245

2) 판정

판정기준값 이상의 흡광도값을 갖는 검체를 양성으로 판정하며, 이 값 미만의 흡광도값을 갖는 검체는 음성으로 판정한다.

** 만일 검체가 양성으로 판정되면 2웰 더 시험을 실시하며, 두 번 모두 음성 결과를 나타내면 음성으로 판정하고 한번 이상 양성 결과를 나타내면 양성으로 판정한다.

** 양성 판정은 의사 등 전문가에 의하여 이루어져야 하며, WESTERN BLOT 등 확인 검사를 통하여 최종 판정하여야 한다.