제네디아 에취비에스에이지엘리자 3.0(수출명: 노바패쓰에취비에스에이지 이아이에이) - 의약품 상세정보

1) 혈장 또는 혈청을 검체로 하며, 혈구나 혈액 응고성분 등의 고형물은 원심하여 완전히 제거한다.

2) 검체내에 Horse Radish Peroxidase의 활성을 저해하는 물질 (예 : 보존제로 쓰이는 질화나트륨)이 함유되어 있을 경우에는 위음성을 보일 수 있으니 주의한다.

1) 모든시약은 실험시작 15-30분전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 항체 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 스트립을 남기고 나머지는 프레임에서 빼내어 실리카겔과 함께 밀봉한 후 2-8℃에 보관한다. 이 때 보관중인 은박포 내에 습기가 들어가면 항체 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축세척액(6번병)을 증류수나 이온정제수로 10배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. (필요한 세척액량이 200 ㎖일 경우 농축세척액 20 ㎖에 증류수나 이온정제수 180 ㎖을 넣어 총 부피가 200 ㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.)

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37±1℃ 항온수조에서 녹인 다음 사용한다.

4) 기질액의 조제

사용하기 5-10분전에 기질액(7번병)과 기질용완충액(8번병)을 1:100의 비율로 혼합하여 사용한다.

【실험시 1 스트립(8wells)당 기질액 10±1㎕에 기질용완충액 1±0.01㎖을 혼합하여 조제한다.】혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다.

기질액은 냉장(4±1℃)에서 얼어 있으니 반드시 37±1℃ 항온수조에서 완전히 녹여 균질화한 후 사용하여야 한다.(기질액의 어는점 18±1℃)

5) 접합체액의 조제

사용하기 10분 전에 농축접합체액(2번병)을 접합체희석액(3번병)으로 1:25의 비율로 필요한 양만큼 희석한다. 【실험시 1 스트립(8wells)당 농축접합체액 10㎕에 접합체희석액 250㎕을 혼합하여 조제한다.】

1) 시험에 필요한 양 만큼 스트립을 꺼내어 프레임에 고정시킨다.

2) 농축접합체액(2 번병)을 접합체희석액(3 번병)으로 1:25의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 접합체액을 제조한다.

3) 플레이트의 1A, 1B, 1C well에는 음성대조액(5번병) 100㎕씩, 1D, 1E well에는 양성대조액(4 번병) 100㎕씩, 나머지 각 well에는 검체를 각각 100㎕씩 차례대로 넣는다.

* 육안 판정법을 실시할 경우는 양성대조액을 음성대조액으로 4배 희석하여 판정 기준액으로 하고 1F, 1G well에 넣는다.

4) 2)번에서 조제한 접합체액을 각 well에 25㎕씩 넣고 Frame을 가볍게 쳐서 잘 혼합한 다음 37±1℃에서 90분간 반응시킨다.

5) 4)번 반응이 끝나기 5-10분전에 기질액(7 번병)을 기질용완충액(8 번병)으로 1 : 100의 비율로 필요한 만큼 희석하여 기질액을 조제한다.

6) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 세척액으로 5회 세척한다. (각 well당 300㎕이상)

7) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 세척액을 완전히 제거한 다음 5)에서 조제한 기질액을 각 well에 100㎕씩 넣고 프레임을 가볍게 쳐서 잘 혼합한 다음 실온에서 30±5분간 반응시킨다.

8) 반응정지액(9 번병)을 각 well에 100㎕씩 넣고 반응을 정지시키고 잘 흔들어 양성반응 well의 청색이 황색으로 완전히 변하게 하다.

9) 공기를 맹검으로하고(air blank) 음성대조액, 양성대조액 및 검체의 흡광도를 측정한다.

흡광도의 측정은 측정파장 450nm, 참조파장 620nm로 한다.

흡광도는 반응정지액을 넣은 후 가급적 30분 이내에 흡광도를 측정한다.

단, 육안판정법은 판정기준액의 흡광도를 기준으로 검체의 흡광도를 관찰한다.

1) 음성대조액의 흡광도 평균값은 0.000 이상 0.200 이하이어야 하며, 양성대조액의 흡광도 평균값은 0.800 이상이어야 한다.

2) 육안으로 판정할 경우는 판정기준액의 흡광도가 음성대조액의 흡광도 보다 높아야 한다.

3) 만약 상기 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각 되므로 그 원인을 확인하여 다시 실험한다.

1) 흡광도 측정기로 측정할 경우

음성대조액의 흡광도 평균값에 0.05을 더한 값을 판정기준값으로 하고, 이 값이상의 흡광도를 나타낸 검체는 양성으로 하며 그 미만의 검체는 음성으로 한다.

예) 음성대조액 1의 흡광도값 0.031

음성대조액 2의 흡광도값 0.033

음성대조액 3의 흡광도값 0.032

합계 0.096

음성대조액의 흡광도 평균값(NCx) = 0.096/3 = 0.032

판정기준값 = NCx + 0.05 = 0.082

2) 육안으로 판독할 경우

육안으로 검체의 흡광도를 관찰하여 판정 기준액의 흡광도보다 낮은 검체는 음성으로 하고, 판정기준액의 흡광도보다 높은 검체는 양성으로 한다.

단, 육안으로 검체의 흡광도를 관찰하여 음성대조액보다 높고 판정기준액보다 낮은 검체는 흡광도 측정기로 흡광도를 측정하여 판정해야 한다.