하이센스티에스에치알3.0엘라이자 - 의약품 상세정보

(1) 본 시험에서는 인간 혈청을 사용 가능하며, 혈구나 혈액응고성분 등의 고형물은 가능한 한 빨리 원심 분리하여 완전히 제거합니다.

(2) 검체 채취시 넣어주는 전형적인 항응고제 (EDTA, citrate, 헤파린)는 본 검사법을 방해하지 않습니다.

(3) 과산화효소의 활성을 저해하는 물질(예: 보존제로 쓰이는 질화나트륨, NaN3)을 함유하고 있는 검체는 위음성이 나올 수 있으므로 사용하지 말아야 합니다.

(4) 검체를 단기간 (2주이내) 보관할 경우는 2-8℃에서 냉장보관하고, 장기 보관시는 -15℃ 이하로 냉동보관 합니다.

(5) 용혈이 심하거나 미생물에 오염된 검체의 경우는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으니 주의하십시오.

(1) 세척액 준비

시험을 시작하기 전 상온에 방치하여 완전히 용해된 20배 농축 세척액을 정제수로 20배 희석하여 필요한 만큼의 세척액을 준비합니다. 세척액은 한 웰 당 3㎖ 가량이 소요되는데, 실제 준비해야 할양은 세척시 사용하는 방법 및 기기에 따라 추가로 필요하게 됩니다. 자동화된 기기를 사용하는 경우, 실지 소요량보다 200㎖가량 추가로 준비하십시오. 이렇게 희석된 세척액은 상온에서 약 30일간 안정하며, 장기보존시 2-8℃에 보관하는 것이 안정합니다.

※ 주의

세척용액 준비 시, 증류수 또는 탈이온수를 사용하여야 합니다. 단, 폴리스티렌 이온 교환수지를 사용하여 제조된 탈이온수는 과산화효소(Peroxidase)를 불활성화 시킬 가능성이 있으므로 사용하지 말아야 합니다. 그리고 세척액은 금속용기 보관을 피하여야 합니다.

(2) 기질 용액 준비

기질용액을 사용하기 전에 사용하고자 하는 웰 수에 따라 적정량의 TMB 농축액을 기질 완충액에 희석합니다. 이때의 희석비는 TMB 농축액 : 완충액 = (1:100)으로서, 한 플레이트를 시험할 경우 TMB 농축액150㎕를 기질 완충액 15 ㎖에 희석하면 충분합니다. 기기를 사용하여 분주할 경우에는 그에 따라 소모되는 용액량이 늘어나므로 필요량보다 5 ㎖가량 여유 있게 준비하십시오. TMB 용액을 희석할 용기는 금속성이 아닌 유리나 플라스틱 재질로 된 용기를 사용하여야 하며 사용 전 반드시 정제수로 세척, 수돗물에 의한 금속성 이온과의 접촉을 방지해야 합니다. 이 용액은 상온에서 보관 시 4시간 안정하며 만일 푸른빛을 띨 경우 다시 만들어야 합니다.

※ 주의

☞ 조제된 기질용액은 용기나 피펫 등에 의해 금속성 물질과 접촉이 있게 되면 발색이 될 수 있으므로 주의하여야 합니다.

☞ TMB 농축액의 주성분은 디메틸설폭싸이드(DMSO) 이므로 신체에 접촉이 없도록 주의하시고, 완충액에 희석 시 충분히 흔들어서 균질액을 만드십시오.

☞ 보존제로 흔히 쓰이는 질화나트륨은 과산화효소의 억제제이므로, 기질용액에 포함되지 않도록 주의하십시오.

☞ TMB 농축액은 냉장 보관 시 얼어 있을 수 있습니다. 이는 시약에는 이상이 없는 것이므로, 완전히 용해시켜 균질화한 후 사용하십시오.

(1) 검사를 시작하기 약 30분 전에 진단 시약들을 상온에 방치시켜, 상온으로 맞춰 준 다음 용액들은 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞어준 후 사용하고, 플레이트는 상온이 된 후에 개봉하여 사용하십시오.

(2) 검사에 필요한 웰의 수를 결정합니다. 각 검사 시, 시험하고자 하는 혈액 시료 수에 추가로 6웰(1개의 기질 Blank, 3개의 음성표준시료, 2개의 양성 표준시료)이 필요합니다. 이때 사용하지 않은 웰들은 자체 밀봉지에 제습제와 함께 밀봉하여 2~8℃에 보관합니다. (이때 스트립의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 마십시요.)

※ 주의: 기기를 사용하여 시약을 분주하거나 세척을 할 경우 스트립이 플레이트에 정확히 끼워져 있지 않으면, 인식을 못하고 지나가거나 정지될 수 있으므로, 모든 단계에서 기기에 넣기 전에 튀어나온 스트립이 없는지 확인하십시오.

(3) 시료준비: 희석할 수 있는 적당한 튜브에 시료 희석액 495㎕를 넣은 후 시료 5㎕를(1:100배 희석) 넣어서 적당히 흔들어 줍니다.

(4) 표준시료들 및 검체들을 웰에 가할 위치를 정해 위치를 기록한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰들에 100 ㎕의 시료 희석액을 각 웰에 분주합니다.

(5) 음성표준시료와 양성표준시료 및 (3)의 방법으로 희석된 시료들을 기질 blank를 제외한 각 웰에 10 ㎕씩 넣고, 약 5~10초 동안 시료들이 웰 바깥으로 튀지않게 조심스럽게 흔들어준 후 플레이트 밀봉테이프로 밀봉합니다.

(6) 밀봉한 플레이트를 37℃±1에서 60±5분 동안 반응시킵니다.

※ 주의: 시료의 분주 시 웰 벽면에 묻지 않도록 주의하여 주십시오. 또한 효소표지 항체용액의 분주 시 분주기 노즐 또는 팁에 의한 교차오염이 발생하지 않도록 주의하십시오. 각각 위음성과 위양성의 원인이 될 수 있습니다.

(7) 반응 후, 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입장치로 제거하고 아래와 같은 세척방법으로 5회 세척합니다. 우선 웰 내의 내용물을 흡입장치로 제거한 후, 세척액을 웰에 완전히 채우고 약 15초~30초 방치한 후 용액을 흡입하는 방법을 5회 반복한 다음, 휴지에 대고 살짝 털어 잔여 용액을 제거합니다.

※ 주의

☞ 밀봉 테이프를 벗길 때 스트립이 플레이트 틀에서 빠져나올 수 있으므로, 기기로 다음단계를 수행할 경우 반드시 제대로 끼워져 있는지 확인하십시오. 스트립이 튀어나와 있으면 기기가 제대로 작동 하지 않을 수 있습니다.

☞ 세척과정 중에서 세척액을 채우고 충분히 방치시킨 후에 제거하는 것이 완전한 세척을 위해 매우 중요합니다. 또한 세척이 끝났을 때 세척액이 남아있지 않도록 세척액을 완전히 제거해 주십시오.

(8) 기질 blank를 제외한 모든 웰에 효소표지항체 용액 100㎕씩을 분주한 후 밀봉 테이프로 밀봉합니다.

(9) 밀봉한 플레이트를 37℃±1℃에서 30분±1분 동안 반응시킵니다.

(10) 반응 후, 플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입장치로 제거하고 세척액으로 5회 세척한 후 휴지에 대고 살짝 털어 잔여 용액을 제거합니다.

(11) 미리 조제한 기질용액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100 ㎕씩 분주 합니다.

(12) 15~30℃, 암소에서30분±1분 동안 반응시킵니다.

(13) 반응 정지액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100 ㎕씩 분주합니다.

※ 주의: 반응을 정지시킨 후에도 약간의 흡광도 변화가 일어나므로 반응정지액 분주 후 1시간 이내에 흡광도를 측정하십시오.

(14) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 450nm에서 흡광도(OD)를 측정 합니다. 만약 이중 파장 흡광도 측정기를 사용할 경우 보조(reference) 파장을 620nm ~ 650nm로 맞추어 사용합니다.

(1) 음성표준시료의 평균 흡광도 NCx 계산

앞 3항의 검사 방법에 따라 음성 표준시료의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출합니다.

a) 음성 표준 시료의 평균 흡광도 값은 - 0.005와 0.2 사이에 있어야 합니다. 만약 흡광도 값이 -0.005 ~0.000 사이로 읽혀졌다면 평균값 계산 시 0.000으로 처리하여 줍니다.

b) 만약 3개의 음성 표준시료의 흡광도 값 중 1개의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 나머지 2개 값의 평균값으로 산출합니다.

c) 만약 3개의 음성 표준시료의 흡광도 값 중 2개 이상의 값이 위 범위를 벗어났을 경우 재실험을 하여야 합니다. -

(2) 양성 표준시료의 평균 흡광도 PCx 계산

앞 3항의 검사 방법에 따라 양성 표준시료의 흡광도를 얻은 다음, 그 두 값의 평균값을 산출합니다.

a) 양성 표준시료의 평균 흡광도 값은 0.8이상 이어야 한다.

b) 양성 표준시료의 평균 흡광도 값이 위 범위를 벗어난 경우 검사과정이나 시약에 문제가 있는 것이 므로 그 원인을 확인한 후 재검사를 하여야 합니다.

(3) 판정 기준치(Cutoff value)의 계산

음성 표준시료의 평균 흡광도(NCx) 값에 0.35를 더하여 판정 기준치를 구합니다.

예) 판정 기준치(Cutoff value) = NCx + 0.35 = 0.060 + 0.35 = 0.410

(1) 검체의 흡광도 값이 판정기준치(Cutoff value)보다 작으면 음성으로 판정하며, 재실험을 수행하지 않아도 됩니다.

(2) 검체의 흡광도 값이 판정기준치(Cutoff value)이상이면 최종 판정을 내리기 전, 두 웰에 반복실험을 하여, 다음과 같은 기준으로 해석을 하여야 합니다.

a) 반복 실험한 값 중 하나만이라도 판정기준치 이상이면 양성으로 판정합니다.

b) 반복 실험한 두 값 모두가 판정기준치보다 작으면 음성으로 판정합니다.

(1) 반응 정지액, 농축 세척액을 제외한 모든 시약들은 동일한 Lot 번호의 것을 사용하여야 합니다.

(2) 모든 검체시료 및 시약을 피펫팅할 때는 사용하였던 피펫팁을 재사용하지 말아야 합니다.

(3) 일단 실험 시작 후에는 웰들이 마르지 않도록, 각 단계 사이에 중단함이 없이 진행되어야 합니다.

(4) 검사되는 시료들이 기질 blank, 양성표준시료 및 음성표준시료와 동일한 조건에서 검사될 수 있도록 하십시오. 한번에 여러 개의 플레이트를 시험하는 경우라도, 모든 플레이트에 각각 기질 blank, 양성 표준시료 및 음성표준시료를 포함시켜서 시험하십시오.

(5) 사용하고 남은 시약 및 웰들은 상기 보관 조건 및 보관 기간에 준수하여 보관, 사용 하십시오.