리아키에취비이에이지/에이비아이알엠에이튜브 - 의약품 상세정보

1) 검체 준비

혈청을 검체로 사용하나 지방질이 많거나 심하게 용혈 된 검체는 쓸 수 없다. 검체는 2~8℃에서 1~2일 보관이 가능하고 더 장기간 보관하려면 -20℃에 냉동 보관한다.

2) 검사 과정

- 검체 및 시약을 약 30분전에 실온에서 예열시킨다.

- 시험 후 남은 코티드 튜브는 첨부된 비닐포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2~8℃에서 냉장 보관한다.

- 각 시약의 유효 기간은 각각의 용기에 표기되어 있다.

- 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용하여 균질화 시킨 후 사용한다.

가. 검사법(HBeAg)

1) 시험할 코티드 튜브를 음성대조액 4개, 양성대조액 2개와 검체는 2개를 기준으로 준비한다. Total Activity 측정용은 일반 시험용 튜브를 준비한다.

2) 각 음성대조액, 양성대조액과 검체를 각각의 코티드 튜브에 200㎕씩 분주한다. 단, 이 과정에서 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

3) 모든 코티드 뷰브에 ¹²⁵I 표지 항체액 100㎕를 분주한다. 단, 이 과정에서 튜브벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

4) 잘 혼합한 후 실온(18℃~25℃)에서 4시간 동안 200rpm으로 혼합 반응시킨다.

5) 모든 코티드 튜브의 시약을 주의하여 흡입한다.

6) 각 코티드 튜브당 증류수 2ml를 가하고 흡입·제거하는 과정을 3회 반복한다.

7) 감마 카운터에서 1분간 각 음성 및 양성대조액과 검체 튜브의 반응 방사능량(cpm)을 측정한다.

나. 검사법(Anti-HBe)

1) 시험할 코티드 튜브를 음성대조액 4개, 양성대조액 2개와 검체 2개를 기준으로 준비한다. Total Activity 측정용은 일반 시험용 튜브를 준비한다.

2) 각 음성대조액, 양성대조액과 검체를 각각의 코티드 튜브에 20㎕씩 분주한다. 단, 이 과정에서 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

3) 모든 코티드 튜브에 중화액을 100㎕씩 분주한다. 단, 이 과정에서 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

4) 모든 코티드 튜브에 ¹²⁵I 표지 항체액 50㎕를 분주한다. 단, 이 과정에서 튜브 벽면에 액이 묻지 않도록 주의한다.

5) 잘 혼합한 후 실온(18℃~25℃)에서 2시간(±10분)동안 200 rpm으로 혼합 반응시킨다.

6) 모든 코티드 튜브의 시약을 주의하여 흡입한다.

7) 각 코티드 튜드방 증류수 2mL를 가하고 흡입·제거하는 과정을 3회 반복한다.

8) 감마 카운터에서 1분간 각 음성 및 양성대조액과 검체 튜브의 반응 방사능량(cpm)을 측정한다. 이 때 ¹²⁵I 표지 항체액의 유효기간을 확인하기 위해 시험용 일반 튜브에 ¹²⁵I 표지 항체액 50㎕를 넣고 총 방사능량(total activity)을 측정한다.

3) 결과 판정

가. HBeAg

1. 총 방사능량(total activity)은 키트의 사용기한 판단에 참고한다.

총 방사능량 : 100000 cpm 이상의 값을 나타내야 시험상 유효성을 가진다.

2. 음성대조액의 평균값 : 4개의 cpm의 평균값을 구한다. 이때 평균값의 0.5~1.5배 범위를 벗어나는 값은 제외시키고 다시 평균값을 구한다.

3. 양성대조액의 평균값 : 2개의 cpm의 평균값을 구한다. 이 때 두 값의 cpm 차이가 2500cpm이내 이어야 시험상의 유효함을 인정한다.

4. 양성대조약/음성대조액 비율(P/N ratio) : 80 이상의 값을 나타내야 시험상 유효성을 가진다.

5. Cut-off 계산 : 음성대조액 평균값 × 2.1

*** 결과 계산 예

아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 것으로 실제 실험치를 적용하면 안 된다.

① 총 방사능량(total activity : 195382 cpm으로 검사 결과 유효하다.

② 음성 대조액 평균 cpm

음성 대조액 1  195 cpm

음성 대조액 2  189 cpm

음성 대조액 3  205 cpm

음성 대조액 4  548 cpm

음성 대조액 평균 cpm : (195+189+205+548) / 4 = 284cpm

*음성 대조액 4는 평균값 0.5-1.5배 범위를 벗어나므로 음성 대조액 4(548cpm) 값을 제외하고 평균값을 다시 계산한다.

즉, 최종 음성 대조액 평균 cpm : (195+189+205) / 3 = 196 cpm

③ 양성대조액 평균 cpm

양성 대조액 1 : 25174 cpm

양성 대조액 2 : 24051 cpm

양성 대조액 평균 cpm : (25174+24051) / 2 =24613 cpm

* 두 값의 차이가 1123cpm 이므로 검사 결과 유효하다.

④ P/N ratio : 24613 / 196 = 125.58cpm 으로 검사 결과 유효하다.

⑤ 판정 기준값

판정 기준값 = 음성 대조액 평균값(NCx) × 2.1 = 196 × 2.1 = 412 cpm

나. Anti-HBe

1. 총 방사능량은 키트의 사용기한 판단에 참고한다.

총 방사능량 : 50000cpm 이상의 값을 나타내야 시험상 유효성을 가진다.

2. 음성대조액의 평균값 : 4개의 cpm의 평균값을 구한다. 이때 평균값의 0.5-1.5배 범위를 벗어나는 값은 제외시키고 다시 평균값을 구한다.

3. 양성대조액의 평균값 : 2개의 cpm의 평균값을 구한다. 이 때 두 값의 차이가 80cpm 이내 이어야 시험상의 유효함을 인정한다.

4. 음성대조액 / 양성대조액 비율(N/P ratio) : 30 이상의 값을 나타내야 시험상 유효성을 가진다.

5. Cut-off 계산 : (음성대조액 평균값 + 양성대조액 평균값) ÷ 2

*** 결과 계산 예

아래 값은 실험 결과의 예를 나타낸 것으로 실제 실험치를 적용하면 안된다.

① 총 방사능량(total activity) : 94777 cpm으로 검사 결과 유효하다.

② 음성 대조액 평균 cpm

음성 대조액 A  12550 cpm

음성 대조액 B  12352 cpm

음성 대조액 C  12394 cpm

음성 대조액 D  22549 cpm

음성 대조액 평균 cpm : (12550+12352+12394+22549) / 4 = 14961 cpm

* 음성 대조액 D는 평균값 0.5-1.5배 범위를 벗어나므로 음성 대조액 D(22549 cpm) 값을 제외하고 평균값을 다시 계산한다.

즉, 최종 음성 대조액 평균 cpm : (12550+12352+12394) / 3 = 12432 cpm

③ 양성 대조액 평균 cpm

양성 대조액 A  289 cpm

양성 대조액 B  315 cpm

양성 대조액 평균 cpm : (289 + 315) / 2 = 302 cpm

* 두 값의 cpm 차이가 26cpm 으로 검사 결과 유효하다.

④ N/P ratio 값 : 12432 / 302 = 41.17 cpm으로 검사 결과 유효하다.

⑤ 판정 기준값

판정 기준값 = (음성 대조액 평균값 + 양성 대조액) / 2

 (12432 + 302) / 2 = 6367 cpm

4) 결과 해석

가. HBeAg

1) 음성 : 검체 cpm < Cut-off value

2) 양성 : 검체 cpm > Cut-off value

3) Cut-off의 ±10% 이내의 구간에 해당하는 cpm을 나타내는 검체는 재검을 실시하여 최종결과를 판정한다. 이때 동일한 결과를 보일 경우 전문의와 상의하여 최종 판정한다.

4) 최초 검사에서 양성으로 판정된 검체는 두 웰에 반복 재검하여 하나이상에서 양성으로 판정 되었을 경우 최종 양성으로 판정하고, 두 개 모두에서 음성으로 판정 되었을 경우 최종 음성으로 판정한다.

나. Anti-HBe

1) 음성 : 검체 cpm > Cut-off value

2) 양성 : 검체 cpm < Cut-off value

3) Cut-off의 ±10% 이내의 구간에 해당하는 cpm을 나타내는 검체는 재검을 실시하여 최종결과를 판정한다. 이때 동일한 결과를 보일 경우 전문의와 상의하여 최종 판정한다.

4) 최초 검사에서 양성으로 판정된 검체는 두 웰에 반복 재검하여 하나이상에서 양성으로 판정 되었을 경우 최종 양성으로 판정하고, 두 개 모두에서 음성으로 판정 되었을 경우 최종 음성으로 판정한다.