제네디아흡입성알레르겐엘리자 - 의약품 상세정보

1) 사람 혈장 또는 혈청을 검체로 사용하며, 혈구나 혈액 응고 성분 등의 고형물을 원심분리하여 완전히 제거한다.

2) 열처리된 검체는 위음성 반응이나 위양성 반응이 일어날 수 있으므로 사용하지 않는다.

1) 모든 시약은 실험시작 15 ～ 30분전에 실온에 둔다.

2) 밀봉된 마이크로 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 스트립을 꺼내고 보관하고자 하는 스트립(strip)은 프레임(frame)에서 빼내어 첨부된 은박포에 실리카겔과 함께 넣어 2 ～ 8℃에 보관한다. 이때 보관중인 은박포 내에 습기가 들어가면 항원 및 항체 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축세척액을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다. (필요한 세척액량이 200 ㎖일 경우 농축세척액 10 ㎖에 증류수나 이온정제수 190 ㎖을 넣어 총 부피가 200 ㎖이 되도록 한 다음 잘 섞는다.)

농축세척액은 냉장보관 상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 37±5℃ 항 온수조에서 녹인 다음 사용한다.

4) 접합체액의 조제

사용하기 5 ～ 10분전에 농축접합체액을 접합체희석액으로 101배의 비율로 필요한 양만큼 희석한다.

(실험시 1 test, 24 wells당 농축접합체액 30 ㎕에 접합체희석액 3 ㎖을 혼합하여 조제한다.)

접합체희석액은 침전이 있을 수 있으니 충분히 혼합하여 사용한다.

5) 기질액의 조제

사용하기 5 ～ 10분전에 기질액과 기질용완충액을 101배의 비율로 필요한 양만큼 혼합하여 사용한다. (실험시 1 test, 24 wells당 기질액 30㎕에 기질용완충액 3 ㎖을 혼합하여 조제한다.) 혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다.

기질액은 냉장에서 얼어 있으니 반드시 37±1 ℃ 수조에서 녹여 균질화 한 후 사용하여야 한다. (기질액의 어는점 18℃)

1) 시험에 필요한 총 IgE 검출용 1개의 Strip과 특이 IgE 검출용 2개의 Strip을 꺼내어 Frame에 고정시킨다.

< 그림 3. 1 test시 마이크로 플레이트 모식도 >

2) 위 그림 3의 모식도와 같이 마이크로 플레이트의 총 IgE 항체 검출용 스트립 6개의 well에 각각의 IgE 표준액(0 ～ 5)을 순서대로 100 ㎕씩, 그리고 나머지 두 개의 well에 검체 원액과 100배 희석한 검체를 100 ㎕씩 넣는다. 알레르겐 특이 IgE 항 체 검출용 스트립 각각의 well에는 검체 원액을 100 ㎕씩 차례대로 넣는다.

3) 마이크로 플레이트를 첨부된 밀봉테이프로 밀봉한 다음 37 ± 1℃에서 90분간 반응 시킨다.

4) 3)의 반응이 끝나기 5 ～ 10분 전에 2. 시약의 준비, 4)접합체액의 조제 항에 따라 농축접합체액을 접합체희석액으로 101배의 비율로 필요한 만큼 희석한다.

5) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

(300 ～ 400 ㎕/well/회)

6) 세척된 마이크로 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 4)에서 조제된 접합체액을 각 well에 100 ㎕씩 넣는다.

7) 마이크로 플레이트를 밀봉테이프로 잘 밀봉한 후 37 ± 1℃에서 30분간 반응시킨다.

8) 7)의 반응이 끝나기 5 ～ 10분전에 2. 시약의 준비, 5)기질액의 조제 항에 따라 기질액을 기질용완충액으로 101배의 비율로 필요한 만큼 희석하여 기질액을 조제한다.

9) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

(300 ～ 400 ㎕/well/회)

10) 세척된 마이크로 플레이트를 흡습지에 뒤집어 가볍게 쳐서 세척액을 완전히 제거한 다음 8)에서 조제한 기질액을 각 well에 100 ㎕씩 넣고 실온에서 30분간 반응시킨다. 이 반응은 직사광선을 피하여 실시한다.

11) 반응정지액 (8번병)을 100 ㎕씩 넣고 마이크로 플레이트를 가볍게 쳐서 발색물을 균질화한다.

12) IgE 표준액과 검체의 총 IgE 항체, 그리고 검체의 특이 IgE 항체에 대한 흡광도를 측정한다. 흡광도는 반응정지액 (8번병)을 넣은 후 30분 이내에 측정하며, 측정파장 450 nm, 참조파장은 620 nm로 한다. (참조 파장이 없는 경우, 측정 파장으로만 측정하여도 됨)

1) IgE 표준액의 흡광도값(O.D. = 450 nm)이 다음 조건을 만족하여야 한다.

표준액 0 < 표준액 1 < 표준액 2 < 표준액 3 < 표준액 4 < 표준액 5

2) IgE 표준액 0, 5의 흡광도값에 있어서는 아래의 표 1에 제시된 조건에 만족되어야 한다.

표 1. IgE 표준액의 흡광도 범위, Class의 구분 및 농도의 정도

3) 만약 이 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 다시 시험한다.

1) 표준그래프의 작성

각 표준액의 흡광도를 이용하여 세로축을 흡광도(O.D), 가로축을 표준액의 농도 (IU/ml)로 설정하고 그래프 용지에 표준액의 표준그래프를 작성한다.

2) 총 IgE 항체와 특이 IgE 항체의 농도 계산

1)에서 작성된 그래프를 이용하여 세로축의 검체의 흡광도가 표준액의 그래프 곡선 상에서 만나는 점을 찾아내어 이 점에 해당하는 가로축의 IgE 항체 농도를 읽어냄 으로써 이를 검체의 총 IgE 항체의 함량, 혹은 각각의 알레르겐에 대한 특이 IgE 항체의 함량으로 한다.

3) 검체의 총 IgE 항체 및 알레르겐 특이 IgE 항체의 농도를 구했으면 아래 표 1을 참조하여 검체의 Class를 구별하고, 농도의 정도를 확인한다.

< 표 1. Class별 IgE 항체의 농도의 정도 >

4) 총 IgE 항체의 경우 검체를 100배로 희석한 것은 희석한 만큼 곱한 후 검체 원액 의 결과와의 평균을 내어 계산한다.

5) 최종판정

총 IgE 항체와 알레르겐 특이 IgE 항체의 Class 및 농도의 정도를 확인한 후, 1차 검사에서 각각의 알레르겐에 대해 양성인 검체는 2회 이상 재검사하여 1 회 재검 사에서 양성이면 최종 양성으로 판정한다. 만일 1회 재검사에서 검체가 음성으로 판정되면 2회 더 시험을 실시하며, 두 번 모두 음성 결과를 나타내면 음성으로 판 정하고 한 번 이상 양성 결과를 나타내면 양성으로 판정한다.

* 총 IgE 항체와 알레르겐 특이 IgE 항체 양성 판정은 반드시 의사 등 전문가에 의하여 이루어져야 하며, 피부단자시험 등의 확인 검사를 통하여 최종 판정하여 야 한다.