제네디아루벨라아이지지엘리자 - 의약품 상세정보

1) 혈청을 검체로 사용하며 혈구나 혈액 응고성분등은 부정확한 반응을 일으킬 수 있으니 원심분리하여 완전히 제거한 후에 사용한다.

2) 1-2일간은 냉장보관하여 사용하여도 되나 그 이상 보관시에는 -20℃ 이하에 동결하여 보관한다.

3) 검체의 면역학적 상태를 평가할 때는 한 개의 혈청검체를 검사한다.

4) 최근 감염에 의한 면역상태의 변화를 관찰할때에는 3주 간격으로 혈청을 채취한다.

5) 검체를 여러차례 동결 용해를 반복하면 항체역가가 떨어져 부정확한 검사결과를 얻을 수 있으므로 반복하여 동결용해하지 않는다.

1) 면역상태의 변화를 검사하기 위해 3 주간격으로 채취한 혈청을 반드시 같은 플레이트에서 나란히 넣고 검사한다.

2) 다른 제조번호의 시약 구성물을 혼합하여 사용하지 않는다.

3) 시약을 사용하기 전에 시약의 온도가 실온(15-25℃)에 도달하도록 한다.

4) 용액을 사용할 때에는 오염이 되지 않도록 주의한다.

5) 접합체액을 사용하였던 용기는 절대로 기질액을 사용하지 않는다.

6) 세척과정은 엘리자법에서 가장 중요한 과정이므로 플레이트의 세척과정은 주의깊게 살펴 보아 정상적으로 세척기가 작동되는지와 세척액이 플레이트의 well의 꼭대기까지 차는지를 확인하여야 한다.

7) 플레이트의 well이 세척과정과 용액의 분주하는 과정사이에 마르지 않도록 하여야 한다.

8) 표준액은 매 검사시마다 포함하여 검사하여야 한다.

1) 모든 시약은 실험시작 15-30분전에 실온에 두어 시약의 온도가 실온에 도달하도록 한 후에 사용한다.

2) 밀봉된 항원흡착플레이트에서 필요한 만큼의 스트립을 꺼내어 사용하고 보관하고자 하는 스트립은 프레임에서 빼내어 첨부된 비닐포에 실리카겔과 함께 넣고 은박포로 이중으로 밀봉하여 2-8℃에 보관한다. 이때 보관중인 비닐포내에 습기가 들어가면 항원 역가의 저하를 일으킬 수 있으니 주의한다.

3) 세척액의 조제

농축세척액(4번병)을 증류수나 이온정제수로 20배 희석하여 필요한 양만큼 준비한다.

[예 : 필요한 세척액량이 200㎖ 인경우에는 농축세척액 10㎖에 증류수나 이온정제수 190㎖을 넣어 총부피가 200㎖가 되도록 한다음 잘 섞는다.]

농축세척액은 냉장보관상태에서 결정이 생길 수도 있다. 이 경우에는 세척액병을 따뜻한 (37℃ 정도) 물속에 넣고 완전히 용해한 후에 사용하여야 한다.

4) 접합체액의 조제

사용하기 5-10분전에(자동기계를 사용할 경우에는 검사를 시작하기전에) 농축접합체액(5번병)을 접합체희석액(6번병)으로 101배 희석한다. [예 : 실험시 1 스트립당 농축접합체액 10㎕에 접합체희석액 1㎖을 혼합하여 조제한다.] 접합체희석액은 침전이 생길 수 있으므로 충분히 혼합하여 사용한다.

5) 기질액의 조제

사용하기 5-10분전에(자동기계를 사용할 경우에는 검사를 시작하기전에) 기질액(7번병)을 기질용완충액(8번병)으로 101배 희석한다. [예 : 실험시 1 스트립당 기질액 10㎕에 기질용완충액 1㎖을 혼합하여 조제한다.] 혼합된 기질액은 직사광선을 피하여 보관한다.

기질액은 냉장보관상태에서 동결되어 있을 수 있으므로 기질액병을 따뜻한(37℃ 정도) 물속에 넣고 흔들어 완전히 용해한 후에 사용하여야 한다.

(기질액의 어는점 18℃)

1) 시험에 필요한 양만큼의 스트립을 꺼내어 프레임에 고정시킨다.

2) 표준액과 검체를 검체희석액으로 101배 희석한다. (깨끗한 시험관에 검체희석액을 1㎖씩 분주하고 각각의 표준액과 검체를 각각 10㎕씩 첨가하여 잘 혼합한다.) 이때 정확한 량의 표준액과 검체의 채취가 중요하므로 정확한 량을 채취하도록 한다.

3) 희석된 표준액은 각각 100㎕씩 2 wells씩 넣고(모두 8 wells), 희석된 검체는 각각 하나의 well에 차례로 100㎕씩 넣는다.

4) 플레이트를 첨부된 씰러로 잘 밀봉한 후(자동기계를 사용할 경우에는 밀봉하지 않음) 37±2℃ 항온기에 30±5분간 항온한다.

5) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

6) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 남아있는 세척액을 제거한 다음 조제된 접합체액을 각 well에 100㎕씩 분주한다.

7) 플레이트를 첨부된 씰러로 잘 밀봉한 후(자동기계를 사용할 경우에는 밀봉하지 않음) 37±2℃ 항온기에 30±5분간 항온한다.

8) 각 well의 내용물을 흡입해 내고 조제한 세척액으로 5회 세척한다.

9) 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 남아있는 세척액을 제거한 다음 조제된 기질액을 각 well에 100㎕씩 분주한다.

10) 실온에서 30±2분간 정치한다.

11) 반응정지액을 각 well에 100㎕씩 분주한다.

12) 마이크로플레이트 판독기로 450nm의 파장에서 흡광도를 읽는다. (참조파장을 사용할 경우에는 620-690nm 사이의 파장을 사용한다.)

1) 표준액 0의 흡광도는 0.200 이하이어야 한다.

2) 표준액 250의 흡광도는 0.600 이상이어야 한다.

3) 상기의 기준에 적합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 재시험을 실시한다.

1) 표준액 그래프의 작성

다음 그림과 같이 가로축에 표준액의 농도를 표시하고 세로축에 흡광도를 표시하여 표준액의 농도와 흡광도를 사용하여 그래프를 그린다. 자동기계를 사용할 경우에는 point to point 방법을 사용하여 표준액 그래프를 그린다.

2) 검체 농도의 산출

가. 위의 그래프를 사용하여 세로축에서 검체의 흡광도를 찾고, 표준액 그래프까지의 수평선을 그어서 만나는 지점에서 다시 수직선을 그어 가로축과 만나는 지점의 농도를 읽으면 그 검체의 농도를 알 수 있다. (IU/㎖)

나. 표준액의 최고농도인 250IU/㎖ 보다 높은 농도를 보이는 검체는 검체희석액으로 적당히 희석하여 검사를 수행하고 나온 농도값에 희석배수를 곱한 것을 농도로 한다.

3) 결과의 해석

가. 검체의 농도가 10 IU/㎖ 이하이면 루벨라 IgG 항체가 존재하지 않는 것으로 판단한다.

나. 검체의 농도가 10-15 IU/㎖이면 루벨라 IgG 항체가 있는지 없는지 구분하기 어려운 상태이며 어떤 경우에는 초기감염일 가능성도 있으므로 3주후 혈청의 결과를 꼭 확인하여야 한다. 미국질병관리센터(CDC)에서는 10 IU/㎖ 이하이면 예방주사를 맞도록 권장하고 있다.

다. 검체의 농도가 15 IU/㎖ 이상이면 루벨라 IgG 항체가 있는 것으로 판단한다.

라. 초기감염이나 최근감염이 의심되는 사람에 대하여는 3 주후에 다시 혈청을 채취하여 먼저 채취한 혈청과 동시에 시험하여 농도의 변화를 관찰한다. 루벨라 IgG 항체의 농도가 두배이상으로 증가되면 최근감염이 의심되며 이 검체를 확인하려면 루벨라 IgM 항체를 검사한다.