에스디엘리자티비테스트키트 - 의약품 상세정보

에스디 엘리자 티비 테스트 키트 효소 면역 측정법을 이용하여 혈청 중의 결핵균 항체를 검출하는 체외 진단용 시약으로

검사원리는 다음과 같다.

1) 1차 반응 시간 동안,검체 내에 결핵균 항체가 존재하는 경우,결핵균 항체는 마이크로웰 플레이트에 흡착되어 있는 결핵균

유전자 재조합 항원과 결합하며,세척시 미결합물은 제거된다.

2) 2차 반응 시간 동안,결합된 결핵 항체는 첨가된 효소 표지 결핵균 항원과 결합되고, 세척시 미결합물은 제거된다.

3) 고정된 효소 표지 결핵균 항원의 과산화 효소와 기질액에 의해 발색하며,검체내의 결핵균 항체의 농도가

높을수록 발색 정도가 커진다.

1) 혈청을 검체로 사용하며,혈구나 혈액 응고 성분 등의 고형물은 가능한 한 빨리 원심분리하여 제거한다.

2) 검체는 2~8℃에서 1~2일간 보관이 가능하지만,더 장기간 보관하려면 -20℃에서 냉동보관합니다.동결,해동을 반복하지 않는다.

3) 지방혈 검체 또는 용혈이 심하거나 미생물 오염된 검체는 부정확한 결과를 나타낼 수 있으므로 사용하지 않는다.

1) 세척액 조제

농축세척액(20x)을 시험 시작 30분 전에 상온에 방치한 후, 탈이온수나 증류수로20배 희석한다.

(예:증류수 950mL에 농축 세척액 50mL을 첨가)세척액은 한 웰당 3ml 정도 소요되는데,세척시 사용하는 방법 및 기기에 따라

필요한 양을 추가로 준비한다.이렇게 희석된 세척액은 2~8℃에 냉장보관하는 것이 안정하다.

2) 기질 용액 조제

사용하고자 하는 웰 수에 따라 적정량의 TMB농축액을 TMB농축액 1:기질 완충액 100의 비로 희석한다.

기질용액은 각 웰당 200㎕씩 소요되며,기기를 사용하여 분주하는 경우 기기에 남아 있는 양을 감안하여 넉넉히 준비한다.

이 용액은 사용하기 직전에 조제하는 것이 좋으며,푸른빛을 띄는 경우 사용할 수 없다. TMB농축액은 냉장 보관시 얼어 있을 수

있으나,시약에 이상이 있는 것은 아니므로,완전히 용해시켜,균질화한 후에 사용한다.

3) 개봉된 시약의 저장방법 및 사용기간

시약명 보관조건 보존기간

항원 흡착 플레이트 2~8℃,밀봉 개봉 후 1개월,키트 유효기간내

효소 표지 항원액 2~8℃ 개봉 후 1개월,키트 유효기간내

검체 희석액 2~8℃ 개봉 후 1개월,키트 유효기간내

양성,음성 대조액 2~8℃ 개봉 후 1개월,키트 유효기간내

기질 완충액 2~8℃ 개봉 후 1개월,키트 유효기간내

TMB농축액 2~8℃ 키트 유효기간내

농축 세척액 2~8℃ 개봉 후 2개월,키트 유효기간내

반응 정지액 2~8℃또는 실온 키트 유효기간내

1) 모든 검체와 시약은 내장 보관하였을 경우, 시험 시작 30분 전에 상온에 방치시켜,상온에 도달시킨다.

2) 검사시 필요한 웰 수를 결정하고, 밀봉된 항원 흡착 플레이트를 꺼내어 필요한 만큼의 스트립을 남긴다.나머지 스트립은 플레이트에서 빼내어,

원래의 알루미늄 호일에 실리카겔 포와 함께 밀봉하여 2~8℃에서 냉장 보관한다.

3) 검체 희석액을 각 웰에 100㎕씩 넣고,플레이트의 1A,1B,1C 웰에 음성 대조액 100㎕씩 나머지는 각 웰에 검체를 각각 100㎕씩 분주한 후 플레이트 밀봉

테이프로 밀봉한다.

4) 밀봉한 흡탁 플레이트를 37±1℃에서 약 2시간 동안 방응시킨다.

5) 반응 후,플레이트 밀봉 테이프를 벗기고 모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입 장치로 제거하고,세척액으로

5회 세척한 후 흡습지에 대고 털어 잔여 용액으 제거한다.이때 세척액량은 1회에 각 웰당 300㎕이상씩하되 넘치지 않도록 한다.

6) 효소 표지 항원액 20-0㎕씩을 항원 흡착 플레이트의 각 웰에 넣고 밀봉테이프로 밀봉한다.

7) 밀봉한 플레이트를 37±1℃에서 약 1시간 동안 반응시킨다.

8) 반응 후,플레이트를 37±1℃에서 약 1시간 동안 반응시킨다.

9) 반응 후,플레이트 밀봉 테이프를 벗기고,모든 웰들의 결합하지 않은 내용물을 흡입장치로 제거하고,세척액으로 5회 세척한 후 흡습지에 대고

털어 잔여 용액을 제거한다. 이 때 세척액량은 1회에 각 웰당 300㎕이상씩 하되 넘치지 않도록 한다.

10) 기질액 200㎕씩을 항원 흡착 플레이트의 각 웰에 분주하고,실온에서 약 30분 동안 반응시킨다.

11) 반응 정지액으 각 웰에 50㎕씩 넣고 잘 혼합하여 청색이 노란색으로 완전히 변하도록 한다.

12) 공기를 맹검으로 하여(Air blank)음성 대조액,양성 대조액 그리고, 각 검체를 흡광도를 측정한다.

이때 흡광도의 측정 파장은 450nm,참조파장을 사용할 경우는 620~650nm하며,반응 정지액을 넣은 후 30분이내에 측정한다.

1) 정도관리

① 음성 대조액의 평균 흡광도값은 0.000이상 0.120이하이어야 하며,양성 대조액의 평균 흡광도 값은 1.670이상이어야 한다.

② 만약 상기기준에 적합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므로 그 원인을 확인하여 다시 실험한다.

2) 음성 대조액의 평균 흡광도(NCx)계산

사용방법에 따라 음성 대조액의 흡광도를 얻은 다음,그 세값의 평균값을 산출한다.

예) 음성대조액1의 흡광도 0.037

음성대조액2의 흡광도 0.02

음성대조액3의 흡광도 0.033

                                     0.037+0.02+0.033

음성대조액의 평균 흡광도 = ------------------- = 0.03

                                                3

위와 같이 계산한 음성 대조액 평균 흡광도를 기준으로 0.5배에서 1.5배 사이를 벗어나는 웰이 1개 이상이면,

그 값을 제외한 나머지 2개 값으로 평균흡광도 값을 산출하고,만약 2개 이상이 이 범위를 벗어나는 경우 재시험하여야 한다.

3) 판정 기준치(Cutoff value)의 계산 및 판정

① 판정 기준치(Cutoff value)=음서어 대조액의 평균 흡광도값+0.250

② 검체의 흡광도 값이 판정기준(Cutoff value)보다 작으면 음성으로 판정하며,재실험을 수행하지 않아도 된다.

③ 검체의 흡광도 값이 판정기준치(Cutoff value)이상이면 최종 판정을 내리기 전에,두 웰에 반복실험을 하여,

반복 실험한 값 중 하나만이라도 판정 기준치 이상이면 최종 양성으로 판정합니다. 최종 양성 판정된 검체는

임상적인 소견과 균체 배양 시험등을 통하여 결핵 감염 여부를 판정한다.