디아키에취비에스에이지엘라이자 - 의약품 상세정보

1) 검체 준비

혈청과 혈장 모두를 검체로 사용할 수 있으나 지방질이 많거나 심하게 용혈된 검체는 쓸 수 없다. 검체는 2～8℃에서 1～2일 보관이 가능하고 더 장기간 보관하려면 -20℃에 냉동 보관한다. 혈장 검체는 섬유소가 존재하여 시험을 방해할 수도 있으므로 항상 시험 전에 원심 분리하여 사용한다.

2) 세척액 준비

진단시험을 시작하기 전 상온에 방치하여 완전히 용해된 20배 농축 세척액을 정제수로 희석하여 필요한 만큼의 세척액을 준비한다. 즉, 농축 세척액 50ml에 정제수 950ml을 넣어 희석한다. 세척액은 실온에서 약 30일간 안정하며, 60일 이상 장기 보존시는 2℃～8℃에 보관하는 것이 안정하다.

2. 검사 과정

- 시약을 약 30분 전에 실온에서 예열시키며 사용 전 가볍게 흔들어 잘 섞은 후 사용 한다.

- 시험 후 남은 플레이트는 첨부된 비닐포에 실리카겔 포와 함께 잘 밀봉하여 2～8℃ 에서 냉장보관한다.

- 각 시약의 유효기간은 각각의 병에 표기되어 있다.(접합체액과 기질액은 개봉 후 3 주가 지나면 사용하지 않도록 한다.)

- 검체는 사용 전에 충분히 혼합한다. 특히 동결되었던 시료는 반드시 혼합기를 이용 하여 균질화 시킨 후 사용한다.

가. 검사법

1) 각 검사시, 1웰의 기질 blank, 3웰의 음성 대조액, 2웰의 양성 대조액과 검사하고 자 하는 검체수를 결정한 후 원하는 웰만큼 스트립을 홀더에 끼운다. 이 때 사용하 지 않은 웰들은 자체 밀봉지에 방습제와 함께 밀봉하여 2～8℃에 보관하며 스트립 의 웰 밑바닥을 손으로 만지지 않도록 주의한다.

2) 음성 대조액과 양성 대조액 및 검체들을 웰에 가할 위치를 정하여 기록을 한 다음, 기질 blank를 제외한 각 웰들에 100ul의 음성대조액과 양성대조액 및 검체를 분주 한다.

3) 접합체액 25ul을 기질 blank를 제외한 나머지 웰에 분주한 후 약 5～10초 동안 혼 합액이 웰 밖으로 튀지 않게 조심스럽게 흔들어 준 후 플레이트 밀봉 테이프로 밀 봉한다.

4) 37℃(±1℃)에서 90분(±5분)동안 반응시킨다.

5) 반응 후, 밀봉시킨 플레이트 밀봉테이프를 벗기고 모든 웰들을 세척액으로 5회 세 척한 후, 웰 내에 잔류액을 완전히 제거한다. 이 때 첫 번째 세척단계에서 각 웰의 내용물을 흡입장치로 완전 제거 후 세척액을 가하고 옆 웰로 넘어 들어가지 않도록 주의하면서 각 웰들을 완전히 채운 후 약 30초～1분간 방치한다. 나머지 4회 세척 단계에서도 세척액이 웰을 완전히 채우도록 하여 세척한다. 이 때 세척액량은 1회 에 각 웰당 300ul이상씩 하되 넘치지 않도록 한다.

6) 기질용액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100ul씩 분주한다.

7) 실온(18～20℃), 암소에서 30분(±1분)동안 반응한다.

8) 반응 정지액을 기질 blank를 포함한 모든 웰에 100ul씩 분주한 후 잘 혼합하여 청 색이 노란색으로 완전히 변하도록 한다.

9) 플레이트 바닥을 부드러운 흡습성 종이로 잘 닦아 습기를 제거한 후 측정기에 따라 기질 blank를 대조로 하되 450nm에서 흡광도(OD)를 측정한다. 만약 이중 파장 흡 광도 측정기를 사용할 경우 보조(reference)파장을 620nm또는 650nm로 맞추어 사용할 수 있으며 30분 이내에 흡광도값을 측정한다.

3. 결과 계산

1) 음성 대조액의 평균값 :

앞항의 진단방법에 따라 음성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 세 값의 평균값을 산출한다.

예)

                                       0.171

 음성대조액의 평균 흡광도 =   = 0.057

                                          3

① 음성 대조액의 평균 흡광도 값은 0.000～0.15 사이여야 한다. 만약 이 기준에 적 합하지 않을 경우에는 실험 기술상의 문제나 시약의 변질로 인한 것으로 생각되므 로 그 원인을 확인하여 다시 실험한다.

② 3개의 음성 대조액 흡광도의 평균값을 계산한다. 그 평균값을 기준으로 0.5배에서 1.5배 사이를 벗어나는 값이 하나이면 그 값을 제외시키고서 평균 흡광도 값을 계 산하고 만약 2개 이상이면 재시험을 한다.

2) 양성 대조액의 평균값 :

앞 항의 진단방법에 따라 양성 대조액의 흡광도를 얻은 다음 그 두 값의 평균값을 산출한다.

예)

                                       4.374

 양성대조액의 평균 흡광도 =  = 2.187

                                          2

① 측정한 양성 대조액의 평균 흡광도(450nm)값이 1.5 이상이여야 하며 두 값의 차 이가 0.5이하여야 한다.

② 음성 대조액의 평균 흡광도와 양성 대조액의 평균 흡광도 차이가 1.3이상이어야 한다.

③ 위의 기준을 벗어나는 경우에는 세척액 희석배수의 오차, 웰 간의 오염, 또는 실험 자의 실수 등이 의심되므로 재실험을 해야 한다.

3) Cut-off value(판정 기준치) 계산 : 음성 대조액 평균값 + 0.050

4) 결과 해석 :

① 검체의 흡광도 값이 cut-off value 미만이면 음성으로 판정하며, 재실험을 수행하 지 않아도 된다.

② 검체의 흡광도 값이 cut-off value 이상이면 최종 판정을 내리기 전에 두 웰에 반 복 실험을 하여 다음과 같은 기준으로 해석을 한다.

첫째, 반복 실험한 값 중 하나만이라도 cut-off value 이상이면 양성으로 판정한 다.

둘째, 반복 실험한 두 값 모두가 cut-off value 보다 작으면 음성으로 판정한다.